[发明专利]一种拓宽四倍体小麦遗传变异的方法

权利要求书

1.一种拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）利用遗传稳定的亲本四倍体小麦AABB与遗传稳定的二倍体节节麦DD进行有性杂交并套袋，在授粉12-15天后，获得三倍体幼胚ABD；

（2）将步骤（1）获得的三倍体幼胚ABD在实验室利用组织培养技术进行小麦幼胚离体培养，获得ABD植株幼苗；

（3）将步骤（2）获得的ABD植株幼苗移栽到田间自然生长，待出现两到三个分蘖时，取回室内，洗净幼苗根部并晾干，然后对ABD幼苗进行染色体加倍处理；

（4）将步骤（3）处理后的幼苗移栽到低温环境自然生长，获得新合成的低世代人工合成六倍体小麦AABBDD；

（5）以步骤（4）中获得的低世代人工合成六倍体小麦AABBDD为母本，步骤（1）中使用的亲本四倍体小麦AABB为父本，在田间进行有性杂交，自然成熟后获得五倍体杂交种子AABBD；

（6）将步骤（5）中获得的五倍体杂交种子AABBD在田间播种，自然生长发育，套袋自交5-6代，获得不同的自交株系，利用荧光原位杂交或基因组原位杂交技术对获得的自交株系根细胞的染色体数目和结构进行鉴定观察，筛选获得新型四倍体小麦材料种子；

（7）将步骤（6）中筛选获得的新型四倍体小麦材料种子在田间播种，自然生长发育，套袋自交获得种子，通过自交加代繁殖，可获得变异丰富、遗传稳定的新型四倍体小麦。

2.根据权利要求1所述的拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，小麦幼胚离体培养采用MS固体培养基进行培养。

3.根据权利要求1所述的拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，对ABD幼苗进行染色体加倍处理的方法为：将ABD幼苗用秋水仙碱和二甲醛亚砜的混合溶液浸泡，同时利用氧气泵在混合溶液底部保持充氧状态；在温度为18-22℃、光照的环境条件下，处理18-22h，之后冲水清洗； ABD幼苗的染色体加倍处理完成。

4.根据权利要求3所述的拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，所述秋水仙碱和二甲醛亚砜的混合溶液的配制方法为：先配制质量百分比浓度为0.04%-0.06%的秋水仙碱溶液，再配制体积百分比浓度为1.2%-1.8%的二甲基亚砜溶液；最后将二者溶液混合均匀，即为秋水仙碱和二甲醛亚砜的混合溶液。

5.根据权利要求4所述的拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，配制的秋水仙碱溶液的质量百分比浓度为0.05%，配制的二甲基亚砜溶液的体积百分比浓度为1.5%。

6.根据权利要求3所述的拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，所述光照的光源为日光灯。

7.根据权利要求1所述的拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，所述步骤（6）中，筛选获得新型四倍体小麦材料种子具体包括下述步骤：

①以步骤（1）中的供体亲本四倍体小麦AABB为对照，对获得的自交株系进行表型鉴定，筛选出表型性状有变异的株系；

②利用荧光原位杂交技术或基因组原位杂交技术对步骤①筛选出的表型性状有变异的株系幼苗根细胞的染色体数目和结构进行细胞学鉴定，筛选获得具有28条染色体数目，且染色体组成和结构与步骤（1）中亲本四倍体小麦AABB有差异的四倍体小麦新材料，即为新型四倍体小麦材料。

8.根据权利要求1所述的拓宽四倍体小麦遗传变异的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述低温环境的温度为3-6℃。