[发明专利]一种病毒RNA释放剂、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种病毒RNA释放剂、试剂盒及其应用，所述释放剂包含0.01‑0.05mmol/L的多果定，0.05％‑0.5％(v/v)曲拉通，5‑15mmol/L氯化钾和0.1％‑0.5％(v/v)的氢氧化钠。相对于现有技术，本发明释放剂配方中所应用试剂价格低廉，配制方法简单，所含试剂不具有化学危险。本试剂能够对病毒进行有效裂解，安全快速的进行核酸释放，操作简单，耗时短。释放后的产物对下游实验无抑制作用，不影响后续PCR等实验的扩增效率。

技术领域

本发明属于RNA提取技术领域，特别涉及一种病毒RNA释放剂、试剂盒及其应用。

背景技术

核酸是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸是一类生物聚合物，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。核酸由核苷酸组成，而核苷酸单体由五碳糖、磷酸基和含氮碱基组成。如果五碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果五碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。

核酸提取是现代分子生物学研究的必要的基础技术，制备高质量核酸是后续研究成功与否的关键。例如，当下，全球针对新型冠状病毒的核酸检测，其前提条件就是对新型冠状病毒颗粒内的核酸进行释放或者提取，才能顺利进行核酸检测，进而达到疫情防控的要求。核酸提取的原则首先保证核酸一级结构的完整，其次要排除其它分子的污染。核酸的提取方法，有着悠久的历史，且形成多种提取方法。针对脱氧核糖核酸(DNA)提取的方法，就包括SDS法、CTAB法、酶裂解法等以先先裂解释放DNA后层析纯化的经典方法，以及基于这些基础的DNA提取方法延展优化而成的多种商业试剂盒，最主要的有柱提法、磁珠法等。针对核糖核酸(RNA)的提取，例如提取新型冠状病毒的RNA，经典方法有Trizol法，以及柱提法、磁珠法等商业试剂盒。

然而，上述核酸提取技术或者试剂盒，虽然已被广泛应用，但在应对本次新型冠状病毒疫情方面，凸显它们的不足之处：核酸提取时间长、过程复杂、易发生交叉污染等问题。上述情况，对核酸制备技术提出了新的需求和要求，就是核酸制备技术要便捷和快速。以湖南圣湘生物以先的国内多款核酸释放剂应运而生，极大满足了市场需求。

即便如此，现有核酸释放剂对病毒核酸释放效率偏低，导致核酸检测应用的灵敏度有所下降。实际实验结果证明，现有的核酸释放剂配方中SDS比例稍有不妥，导致后续PCR实验严重受到抑制。

发明内容

发明目的：针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种病毒RNA释放剂及其应用，该释放剂成本低廉，使用方便快捷，能够提高核酸释放效率，提取的产物对后续PCR反应无抑制作用，且对温度没有特殊要求。

技术方案：为达到上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种病毒RNA释放剂，所述释放剂包含0.01-0.04mmol/L的多果定(十二烷基胍醋酸盐)，0.05％-0.5％(v/v)曲拉通(Triton X-100)，5-15mmol/L氯化钾(KCl)，0.1％-0.5％(v/v)的氢氧化钠。

优选，所述氢氧化钠为浓度50％的氢氧化钠水溶液。

所述释放剂中，使用多果定代替传统的胍盐可以降低对下游实验的抑制作用，能够对样本进行有效的裂解，释放核酸。所述的曲拉通是一种途广泛的非离子表面活性剂，使病毒外壳蛋白裂解以及核酸与蛋白的分离。所述的氯化钾能够提供盐离子，破坏蛋白稳定性，增加释放效率。所述的氢氧化钠能够使蛋白质变性。

优选，所述释放剂包含0.02-0.03mmol/L的多果定，0.05％-0.1％(v/v)曲拉通，5-10mmol/L氯化钾和0.1％-0.3％(v/v)的氢氧化钠。