[发明专利]基于葡聚糖的新型纳米载体、制备方法及其对药物的包载方法

权利要求书

1.一种基于葡聚糖的纳米载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、制备葡聚糖大分子链转移剂；

步骤二、将葡聚糖大分子链转移剂溶于水中，再加入甲基丙烯酸羟丙酯；待完全溶解后，加入钌联吡啶配体溶液；将反应物在氩气条件下遮光除氧10 min后，将反应器放入装有460 nm紫外光灯的暗室中反应，得到基于葡聚糖的纳米载体；

所述葡聚糖大分子链转移剂的制备包括以下步骤：

步骤a、按重量份，将1份葡聚糖和2.4~2.5份氢氧化钠溶于12~18份水中，在60~80℃下搅拌溶解，然后滴加1.7~1.9份氯乙酸，继续在60~80℃下反应1.5~2.5h；降至室温后加入乙酸调节溶液pH至中性；再将液体沉淀至180~250份乙醇中，除去上层清液后将沉淀溶于8~12份水中，透析，冷冻干燥得到羧基化葡聚糖；

步骤b、按重量份，将0.1~0.2份羧基化葡聚糖溶于4~6份水中，得到羧基化葡聚糖水溶液；将0.003~0.004份己二胺溶于8~12份水中，得到己二胺溶液，用4~6mol/L的HCl溶液调节己二胺溶液pH至5.5~6.5；再将羧基化葡聚糖的水溶液以1份/min的速度滴加至己二胺溶液中，待稳定后，再次调节pH至5.5~6.5，然后加入0.15~0.17份1-乙基3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐EDAC，搅拌，常温下反应3~5 h后再加入0.1~0.13份1-乙基3-(3-二甲氨基丙基) 碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌反应7~9h；过滤后透析3~5天，冷冻干燥得到白色絮状产物；

步骤c、按重量份，取0.04~0.05份步骤b的白色絮状产物溶于25~30份水中，然后将0.001~0.0015份RAFT试剂溶于3mLDMSO中，将两者混合均匀后常温下遮光反应20~30h，然后透析2~4天并冷冻干燥，得到葡聚糖大分子链转移剂；

所述RAFT试剂的制备方法包括以下步骤：

步骤Ⅰ、按重量份，4~4.5份将4，4'-偶氮二（4-氰基戊酸）和4.2~4.7份2-巯基噻唑溶解在180~250份二氯甲烷中，然后在氩气条件下除氧25~45min；将6.5~7份二环己基碳二亚胺和0.08~1.12份4-二甲氨基吡啶溶解在80~120份二氯甲烷中，之后在室温下1份/min的速度滴加到除氧后的溶液中；搅拌，反应18~24h，抽滤，取溶液进行旋转蒸发浓缩；再将浓缩后的溶液过冷乙醚中进行沉淀；再次抽滤，取固体，将固体进行真空干燥，得到黄色固体粉末；

步骤Ⅱ、按重量份，使用恒压漏斗向12~14份甲醇钠中加入5.5~6.5份丙硫醇，搅拌溶解10 min后，控制反应温度在0℃时溶于甲醇；将溶液继续搅拌10 min，加入6~6.5份二硫化碳，反应22~26h，除去溶剂得到粗产品；用氢氧化钠溶液调节pH至13，乙醚萃取未反应的反应物，收集水相，HCl溶液调节pH至2，乙醚萃取，取乙醚相；重复多次以上步骤后将最终产物溶于水相；所述氢氧化钠溶液的配制方法为：按重量份，取5~7份氢氧化钠加入180~220份水中；所述HCl溶液的配制方法为：按体积份，取8~12份盐酸溶解在180~220份水中；

步骤Ⅲ、按重量份，将8~12份铁氰化钾溶于40~60份水中，用恒压漏斗加入步骤Ⅱ的产物，反应10~14 h后得到红棕色油状物；取产物用石油醚与乙酸乙酯的混合溶液萃取，再用无水硫酸钠洗涤，旋转蒸发后通过柱层析分离得到纯化的产品；所述石油醚与乙酸乙酯的体积比为1：3；

步骤Ⅳ、按重量份，取1.2~1.5份步骤Ⅲ的产品和2.5~3.5份步骤Ⅰ黄色固体粉末产物溶解在140~160份乙酸乙酯中，除氧1 h，在80~85℃下加热回流反应15~20 h；旋转蒸发除去溶剂，通过柱层析分离得到纯化的产物，即RAFT试剂。

2.如权利要求1所述的基于葡聚糖的纳米载体的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，按重量份，将0.002~0.004份葡聚糖大分子链转移剂溶于0.8~1.2份水中，再加入0.04~0.06份甲基丙烯酸羟丙酯；待完全溶解后，加入0.015~0.025份钌联吡啶配体溶液；将反应物在氩气条件下遮光除氧10min后，将反应器放入装有460 nm紫外光灯的暗室中反应5~7h，得到基于葡聚糖的纳米载体。