[发明专利]非酒精性脂肪性肝病易感基因的早筛方法及试剂盒

说明书

本发明提供了非酒精性脂肪性肝病易感基因的早筛方法及试剂盒，具体的本发明考虑了中国人群与欧美人群非酒精性脂肪性肝病基因谱的差异性，筛选出与中国人非酒精性脂肪性肝病易感相关基因的SNP位点的组合，利用核酸质谱仪对非酒精性脂肪性肝病相关的遗传学标识进行广泛(高通量检测位点、高通量检测样本)筛查和检验。通过本发明的方法检出成功率高、技术重现性好、性价比高，可实现单个小样本多基因的检测，满足小样本最大化使用；本发明的方法具有高准确性、高灵敏性的技术优势，检测结果稳定，提高了检测阳性率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种用于非酒精性脂肪性肝病易感基因的早筛方法及试剂盒。

背景技术

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10％～30％，其中10％～20％为NASH，后者10年内肝硬化发生率高达25％。近10年来，愈来愈多研究揭示了基因多态性与NAFLD的相关性，尤其在部分既无中心性肥胖又无胰岛素抵抗的NAFLD患者中，基因可能起到了关键作用。

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNPs)是一种遗传标记，是指基因组水平上由于单核苷酸的变异，而引起的DNA序列的多态性。在人群中的发生频率大于1％，包括单碱基的转换、颠倒以及单碱基的插入或缺失等形式表现，是一种新的遗传标志，可以为疾病的预测、诊断、治疗以及新型药物的研制提供可靠的有效的科学根据。

SNP在疾病基因定位中所发挥的作用主要包括：1.在疾病定位区域中寻找致病SNP，这种SNP的出现可能直接导致了基因转录水平上和翻译水平上的变化，即改变了基因表达量或者基因产物蛋白质的组成结构，从而导致某种疾病发生或使得个体对某种特殊的环境易感；2.SNP作为一个遗传标记，与疾病或表型紧密连锁。近年来利用SNP预测疾病的发生发展已经成为临床和科研工作者的热点，且在肿瘤和心脑血管等重大疾病预测上的应用价值已初见端倪。

许多NAFLD是没有症状的，且对于该疾病的疑似诊断也通常依靠ALT水平升高，以及其他临床和生化检查特点，或者无意间由腹部超声检查发现。由于NAFLD进展缓慢，大多数随机对照试验并没有发现可以绝对减少进展为肝硬化风险的药物，但是持续的减重可以改善肝功能，肝病理，因此目前生活方式的改善仍然是关键的干预手段。因此确定NAFLD患者较高发风险的一些预测因素非常重要，这可能有助于在NAFLD诊断时针对给定患者采用适当的治疗方法。目前临床尚未有十分有效的早期检查方法，因此亟需建立一种高灵敏，经济，简单的分子技术筛查方法，造福非酒精性脂肪性肝病诊治。

发明内容

本发明的目的在于提供一种非酒精性脂肪性肝病易感基因的早筛方法及试剂盒。

本发明的第一方面，提供了一种非酒精性脂肪性肝病易感基因的早筛试剂盒，所述试剂盒包括PCR扩增引物对组，所述PCR扩增引物对组包括特异性扩增选自下组的SNP位点的引物对：rs738409、rs58542926、rs780094、rs641738、rs72613567、rs3480、rs7674434、rs12152703、rs5764455和rs6006473。

在另一优选例中，所述试剂盒基于多重PCR飞行时间质谱检测非酒精性脂肪性肝病易感基因SNP基因突变位点。

在另一优选例中，所述试剂盒还包括单碱基延伸引物组。

在另一优选例中，所述PCR扩增引物对组中，特异性扩增rs738409的引物对如SEQID NO.1至SEQ ID NO.2所示。

在另一优选例中，所述PCR扩增引物对组中，特异性扩增rs58542926的引物对如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4所示。