[发明专利]克罗恩病易感基因的早筛方法及试剂盒

说明书

本发明提供了克罗恩病易感基因的早筛方法及试剂盒，具体的本发明考虑了患病人群与健康人群基因谱的差异性，筛选出与克罗恩病易感相关基因的SNP位点的组合，利用核酸质谱仪对克罗恩病相关的遗传学标识进行广泛(高通量检测位点、高通量检测样本)筛查和检验。通过本发明的方法检出成功率高、技术重现性好、性价比高，可实现单个小样本多基因的检测，满足小样本最大化使用；本发明的方法具有高准确性、高灵敏性的技术优势，检测结果稳定，提高了检测阳性率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种用于克罗恩病易感基因的早筛方法及试剂盒。

背景技术

克罗恩病(Crohn's disease，CD)是一种原因不明的肠道炎症性疾病，又叫做局限性回肠炎、局限性肠炎等，在胃肠道的任何部位均可发生，可能与感染、体液免疫和细胞免疫有一定关系。是一些易感体制(携带易感基因)的人在外界环境因素的刺激下发生的一种自身免疫异常的疾病，也是一种由多个基因共同参与的胃肠道慢性炎性肉芽肿性疾病。大量的信号通路研究证据表明相关基因位点与CD的遗传易感性密切相关，在CD的发病中起重要作用，为CD今后发病机制的研究，及有关基因筛选治疗奠定了理论基础。

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNPs)是一种遗传标记，是指基因组水平上由于单核苷酸的变异，而引起的DNA序列的多态性。在人群中的发生频率大于1％，包括单碱基的转换、颠倒以及单碱基的插入或缺失等形式表现，是一种新的遗传标志，可以为疾病的预测、诊断、治疗以及新型药物的研制提供可靠的有效的科学根据。

SNP在疾病基因定位中所发挥的作用主要包括：1.在疾病定位区域中寻找致病SNP，这种SNP的出现可能直接导致了基因转录水平上和翻译水平上的变化，即改变了基因表达量或者基因产物蛋白质的组成结构，从而导致某种疾病发生或使得个体对某种特殊的环境易感；2.SNP作为一个遗传标记，与疾病或表型紧密连锁。近年来利用SNP预测疾病的发生发展已经成为临床和科研工作者的热点，且在肿瘤和心脑血管等重大疾病预测上的应用价值已初见端倪。

克罗恩病，其原因至今不明，可能与感染、免疫、遗传有一定关系。该病主要累及小肠和结肠，引起贯穿肠壁各层增殖性病变，会侵犯肠系膜以及局部淋巴结，发病率约克罗恩病起病大多比较隐匿，从发病早期症状出现至确诊往往需数月至数年。病程呈慢性，长短不等的活动期与缓解期交替，有终生复发倾向。少数急性起病，可表现为急腹症，酷似急性阑尾炎或急性肠梗阻。克罗恩病的发生可能伴随其他炎症性肠病，它累及的消化道位置也比较广，临床上会结合血检、大便检测、小肠CT、磁共振检测、结肠镜和小肠镜检测共同进行诊断，这繁琐检测过程给患者造成了极大的不便。临床上可分早期(症状多不明显，是本病诊断困难的重要原因之一)，活动期(症状明显)，缓解期(有效治疗后症状好转)或慢性活动性(多因对药物依赖或抵抗，治疗不规范所致)。病理学上可分为早期、活动期、慢性炎症期或消退期等。本病所处期不同，临床表现差异巨大，早期没症状，活动期表现明显，缓解期症状轻微。最新临床研究表明，对克罗恩病的研究首次发现了一个遗传标记的存在，可以根据此遗传标记对不同患者实现个性化药物治疗。目前临床尚未有十分有效的早期检查方法，因此亟需建立一种高灵敏，经济，简单的分子遗传标记筛查方法，通过克罗恩病易感基因的筛选提前诊治，为早期克罗恩病患者带来福音，为克罗恩病患者带来个性化的治疗与更好的预后。

发明内容

本发明的目的在于提供一种克罗恩病易感基因的早筛方法及试剂盒。

本发明的第一方面，提供了一种克罗恩病易感基因的早筛试剂盒，所述试剂盒包括PCR扩增引物对组，所述PCR扩增引物对组包括特异性扩增选自下组的SNP位点的引物对：rs72553867、rs4409764、rs3731772、rs17525495、rs13361189、rs9637876、rs10065172、rs2241880、rs6754677、rs2066844、rs2066847、rs7574865、rs1004819、rs1495465、rs11465788、rs4343、rs744166和rs11235604。