[发明专利]SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用

说明书

本发明公开了一种SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，属于肿瘤生育保护技术领域。具体的是采用基因治疗手段对受试哺乳动物体的卵巢原位注射一定剂量的AdV‑SIRT1，并检测SIRT1的过表达水平。通过对损伤部位进行修复以实现对卵巢功能重建的目的。因此，AdV‑SIRT1重组载体及其药物制剂可以在不影响抗癌效果情况下保护卵巢功能，其作为新型药物在修复卵巢损伤和/或对抗延缓卵巢衰老和/或改善卵巢储备功能和/或重建卵巢功能等方面发挥重要作用。

技术领域

本发明涉及SIRT1在卵巢功能保护药物方面的应用，属于肿瘤生育保护技术领域，具体地涉及一种SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用。

背景技术

卵巢功能和生育能力是影响女性生存质量的重要因素。现有影响女性卵巢功能的因素有：年龄、遗传、免疫、医源性、感染性、环境、行为学、社会心理等多种因素。其中化疗导致的医源性卵巢损伤在临床常见且急需得到改善。

化疗可导致卵巢功能受损，其引起的生殖内分泌紊乱可表现为闭经、不孕、围绝经期症状及心理障碍等，且化疗对卵泡损耗和卵巢功能的损伤是不可逆的，研究发现化疗或者全身放疗所致的女性卵巢早衰和不可逆转的不孕发生率高达80～100％，严重影响患者的身心健康。

因此，探寻化疗同时保护卵巢功能、减少卵巢损伤以及后期补救治疗的措施显得尤为重要。针对化疗引起的卵泡损伤、卵泡池耗竭加速、卵巢储备下降等问题，各地学者已开展多项研究。目前主要的生育功能保护措施如下。1、胚胎冷冻保存，其优点是技术较完善成熟、成功率较高；缺点是卵母细胞刺激和成熟需要4～6周，会导致化疗延迟，故可能不适合需要紧急化疗的患者，且需要男性伴侣或精子捐赠者，卵巢激素刺激不适合雌激素受体阳性的女性乳腺癌患者。2、成熟卵母细胞冷冻保存，其优点是不需要精子供体；缺点是目前成功率低于胚胎使用，同样会延迟化疗可能不适合浸润性癌，激素刺激可能不适合乳腺癌。3、卵巢组织冷冻保存和再植入，成功率尚不明确，优点是化疗时间无需延迟，可用于卵母细胞刺激延迟不恰当的患者；缺点是目前尚处试验阶段，可能导致继发恶性肿瘤。

SIRT1是Frye等于1999年在人体内首次发现，其定位于人染色体10q21.3，基因长约为33.72kb，结构具备很高的保守性。SIRT1的cDNA开放阅读框长约2，4kb，包含9个外显子和8个内含子，可以编码747个氨基酸约81.7kDa相对分子量的蛋白质。SIRT1的基本组成结构：主要由Rossmann折叠构成的一个保守性较高的大结构域：由一个锌带和一个螺旋结构组成的保守性较低的小结构域。底物结合在大小结构域之间形成的一个空隙中发生催化反应。SIRT1的特殊结构决定了它的生物学功能，包括参与基因转录、DNA复制、DNA损伤修复和代谢调控等一系列的细胞活动。

文献“SIRT1在卵巢衰老方面的研究进展”中记载了合成的特异性烟酰胺腺甘酸二核苷酸-依赖性去乙酰化酶-1(SIRT1)激活剂SRT1720可通过激活SIRT1抑制MTOR信号通路，从而抑制始基卵泡募集、卵泡成熟和闭锁，改善高脂饮食诱导肥胖小鼠的卵泡储备，从而延长小鼠卵巢寿命。这是申请人团队写的SIRT1在卵巢功能保护方面的综述，为探究干预该基因进而保护卵巢储备和功能提供理论支持。

文献“感染过表达Sirtuin1腺病毒对卵巢颗粒细胞的影响”中记载了外培养人卵巢原代颗粒细胞及KGN细胞系，感染过表达长寿蛋白-1(Sirtuin1)的腺病毒(Sirtuinl过表达重组腺病毒Sirtuinl-Adv购自生工生物工程有限公司)后，使用real-time PCR比较Foxo1、AMPK、AKT1、Pi3k、Caspase9相对表达水平，及自噬相关基因Atg5、mfn2、LC3B的相对表达水平。发现人卵巢颗粒细胞及传代KGN细胞系感染腺病毒过表达Sirtuin1后，Sirtuin1表达水平升高，Foxo1、AMPK、AKT1、Pi3k、Caspase9mRNA表达水平均同向降低。