[发明专利]一种检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针，其结构式如式（1）所示：

式（1）。

2.一种检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将溶解了三氯氧磷的CH₂Cl₂溶液加入到冷却的DMF和CH₂Cl₂形成的混合溶剂中，完成后继续加入环己酮，并将得到的混合液加热回流，完成后对得到的反应液冷却结晶，得到的固体产物记为产物1，备用；

（2）将2,3,3-三甲基吲哚和碘乙烷溶解在甲苯中，将得到的混合物加热回流，完成后将得到的反应液冷却结晶，将得到的固体产物洗涤干净，记为产物2，备用；

（3）将所述产物1、产物2、乙酸钠溶解在乙酸酐中，将得到的混合物进行加热反应，完成后将得到的反应液冷却结晶，将得到的固体产物洗涤干净后烘干，记为产物3，备用；

（4）将所述产物3和乙酸钠溶于无水溶剂中，然后在保护气氛中将得到的混合物加热反应，完成后用饱和碘化钾溶液洗涤得到的反应液，再用二氯甲烷萃取反应液，将得到的萃取液进行浓缩，然后对得到的固体产物进行纯化，纯化后产物记为产物4，备用；

（5）将4-溴甲基-3-硝基苯甲酸、二氯甲烷和DMF混合后冷却，然后加入草酰氯，待气体逸出停止，对反应液搅拌，反应完成后浓缩反应液，得4-溴甲基-3-硝基苯甲酰氯，备用；

（6）将所述产物4溶解在无水二氯甲烷中，然后在保护气氛下先加入三乙胺，再加入溶解在无水二氯甲烷中的所述4-溴甲基-3-硝基苯甲酰氯，并使反应在低于室温的冷却环境中进行，待反应液由红色变为绿色后继续在所述冷却环境下静置，然后将反应液恢复至室温并静置，反应完成后除去溶剂，对得到的固体产物进行纯化，纯化后产物记为产物5，备用；

（7）在二氯甲烷和在碳酸氢钠存在下，于保护气氛中用苯丁酸氮芥与所述产物5反应，反应结束后除去反应液中溶剂，对得到的固体产物进行纯化，即得所述荧光分子探针。

3.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，加热回流的温度为20~40℃，时间为3~5h。

4.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述混合溶剂的温度需要控制在零下15~10℃。

5.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述CH₂Cl₂和DMF的体积比=1:1~3:1。

6.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，CH₂Cl₂溶液中三氯氧磷的浓度为0.3~0.9 μmol/L。

7.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，2,3,3-三甲基吲哚和碘乙烷的摩尔比为5:9~2:3。

8.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，加热回流的温度为80~100℃，时间为20h。

9.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，可以采用石油醚、DMF中的任意一种对结晶得到的固体产物进行洗涤。

10.根据权利要求2所述的检测还原应激下DNA靶向的Cys荧光分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，产物1、产物2、乙酸钠的添加比例依次序为1：3：0.5，摩尔比。