[发明专利]乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物及其筛选方法

权利要求书

1.一种基于患者临床数据和蛋白组学的乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物筛选方法，其特征是：包括下列步骤：

1) 收集肝组织标本，包括健康对照、慢乙肝患者、乙肝肝硬化患者以及HBV-ACLF肝组织标本；

2) 运用TMT标记定量的蛋白组学技术检测肝组织样本的蛋白组；

3) 比较健康对照、慢乙肝患者、乙肝肝硬化患者肝组织中的蛋白组，分析处理数据，获得HBV-ACLF生物标记物；步骤3)包括：

（A）经质谱原始数据MaxQuant软件搜库鉴定后，剔除非Swiss prot数据库蛋白，再剔除污染蛋白及诱骗数据库蛋白，最后剔除特异性肽段少于2个的蛋白;

（B） 根据FDR  0.05的原则，筛选HBV-ACLF组与其他组的差异表达蛋白；

（C）在差异表达蛋白中筛选血清DDA（血清蛋白表达谱）可检测的蛋白;

（D）筛选肝组织特异性表达及差异倍数大于2倍的蛋白；

（E）筛选适用于PRM（Parallel Reaction Monitoring）的蛋白为HBV-ACLF生物标记物；

 4)从步骤3) 所述的HBV-ACLF生物标记物中确定乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物；

所述的步骤4)包括：（A）收集HBV-ACLF患者临床资料，包括入院检验及检查数据，并发症情况；将患者根据30天是否存活分为生存组和死亡组；

（B）采用SPSS 22.0软件，利用logistic回归分析，结合临床资料及筛选出的蛋白标记物，建立预测HBV-ACLF患者30天是否死亡的预后预测模型；

（C）采用SPSS 22.0软件，计算不同预后模型，包括Child-Pugh，MELD，CLIF-C ACLF，COSSH，HINT的ROC曲线及曲线下面积，并与新建立的模型进行比较；

步骤3)所述的HBV-ACLF生物标记物为39个，分别为：FTCD、PLMN、PIGR、HBD、C1QC、CO9、A2GL、AMBP、A1AG1、VTDB、ALDOB、CFAI、1A24、S10A9、CO8B、TSP1、ADH4、APOA、A2AP、MBL2、C1TC、MMP9、FAAA、A1AG2、C4BPB、ZA2G、PON1、PGM1、FHR2、CRIS3、NGAL、ACY1、ITIH4、PON3、PCKGM、UGPA、PRG4、BHMT1、ZPI；

步骤4) 所述的乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物为一组四个：PLMN，VTDB，ZA2G和 A2GL。

2. 根据权利要求1所述的筛选方法，其特征是：步骤1) 肝组织标本包括6例正常对照(normal control，NC) 的供肝，6例慢乙肝 (chronic hepatitis B， CHB)，7例乙肝肝硬化(liver cirrhosis，LC)，和8例HBV-ACLF患者的肝组织。