[发明专利]一种一级优质长重粒、广谱抗稻瘟病常恢兼用型水稻恢复系的分子育种方法

权利要求书

1.一种一级优质长重粒、广谱抗稻瘟病常恢兼用型水稻恢复系的分子育种方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以籼型优质常规稻粤晶丝苗2号作母本，以籼稻恢复系蜀恢527作为父本进行杂交，获得F1代种子；种植F1代，成熟后全部单株混收获得F2代种子；

(2)种植F2代种子获得遗传分离大群体，分单株提取DNA，利用分子标记对恢复基因Rf3和Rf4进行检测，以恢复系蜀恢527为对照，筛选双基因均纯合Rf3Rf3Rf4Rf4和基因型单纯单杂Rf3rf3Rf4Rf4和Rf3Rf3Rf4rf4的单株，然后从这些单株中选择穗瘟达到抗和高抗且农艺性状优良的单株作为目标单株，分单株收获种子形成F3株系；

(3)分株系种植F3代种子，利用分子标记对广谱抗性基因Pi2和Pi5基因型进行检测，选择双基因型均纯合Pi2 Pi2 Pi5 Pi5和基因型单纯单杂Pi2pi2Pi5 Pi5、Pi2 Pi2 Pi5 pi5且农艺性状优良的单株做为备选单株，对照选育系谱，恢复基因Rf3和Rf4双基因均纯合Rf3Rf3Rf4Rf4的备选单株直接入选；基因型为单纯单杂Rf3rf3Rf4Rf4和Rf3Rf3Rf4rf4的备选单株继续进行分子标记检测，筛选出双基因均纯合Rf3Rf3Rf4Rf4的单株，以上单株均分单株收获种子，形成F4株系；

(4)分株系种植F4代种子，对照选育系谱，对广谱抗性基因Pi2和Pi5双基因型均纯合Pi2 Pi2 Pi5 Pi5的株系直接选择农艺性状优良的单株；基因型为单纯单杂Pi2pi2Pi5 Pi5和Pi2 Pi2 Pi5 pi5的株系继续进行分子标记检测，筛选双基因型均纯合Pi2 Pi2 Pi5 Pi5且农艺性状优良的单株，以上单株均分单株收获种子，形成F5株系；

(5)分株系种植F5代种子，选择农艺性状优良的单株与那丰A进行测交，收获测交种以及对应测交单株形成F6株系；

(6)种植测交种以及对应测交单株形成F6代种子，选取杂种优势强、结实率和产量高以及小区植株整齐度好的对应单株，分单株收获种子形成F7株系；

(7)利用稻瘟病菌株分别对每个F7代株系进行室内苗期抗性鉴定和田间稻瘟病穗瘟抗性鉴定，根据抗性鉴定结果，选取抗谱广且达到高抗的单株，分单株收获种子，形成F8株系；

(8)分株系种植F8代种子，按株系混合提取每个株系的DNA，利用与Pib和pi55(t)紧密连锁的分子标记进行检测，筛选出携带有Pib和pi55(t)基因型纯合的株系；

所述步骤(2)中使用的分子标记序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示；

所述步骤(3)中Pi2和Pi5基因型进行检测使用的分子标记序列如SEQ ID NO.5至SEQID NO.8所示；

所述步骤(4)中使用的分子标记序列如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.8所示；

所述步骤(8)中使用的分子标记序列如SEQ ID NO.9至SEQ ID NO.14所示。

2.根据权利要求1所述的分子育种方法，其特征在于，所述步骤(2)中F2代遗传分离大群体种植株数在3000株以上。

3.根据权利要求1所述的分子育种方法，其特征在于，所述步骤(2)中农艺形状优良是指千粒重≥32.0g，谷粒长≥10.5mm。

4.根据权利要求1所述的分子育种方法，其特征在于，所述步骤(7)中利用稻瘟病菌株进行抗性鉴定时使用的稻瘟菌孢子的浓度为2×10⁵个/mL。

5.根据权利要求1所述的分子育种方法，其特征在于，所述步骤(7)中室内苗期抗性鉴定和田间稻瘟病穗瘟抗性鉴定是按照中国农业部行业标准《水稻品种试验稻瘟病抗性鉴定与评价技术规程》(NY/T2426-2014)进行抗性评价。