[发明专利]一种基因治疗减肥的生物药剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种基因治疗减肥的生物药剂，包括AAV2、TBG、APOA4，所述AAV2、TBG、APOA4在体外通过基因重组形成能用于静脉注射的基因载体生物药剂，并同时公开该生物药剂的制备方法，通过基因的获取、克隆、转染、扩增、纯化来制备。该发明以AAV2作为治疗基因向机体靶器官靶细胞的转运的载体；TBG是肝脏特异性表达的启动子，确保基因定向递送至肝脏，在肝脏制造基因产物；治疗基因是APOA4，可编码合成为46kDa的载脂蛋白A4；作为减肥药剂不用每天长期重复用药，无毒副作用，一次性用药，就可长久持续发挥减肥效果。

技术领域

本发明涉及减肥药剂，尤其是一种基因治疗减肥的生物药剂及其制备方法。

背景技术

肥胖已成为严重的全球性医疗问题和社会问题。据2013年统计，肥胖已影响4亿以上中国人的健康，预计未来数十年我国的肥胖人群还将迅速上升。肥胖通常为导致高血脂症、2型糖尿病、脂肪肝、高血压、心血管疾病和癌症等疾病的高危因素，每年全球因此而死亡的人数大概有300万。

目前用于减肥的药物与10年前相比并未取得明显进步，原因是因为严重不良反应的发现。现有的减肥药有两大类，胰脂肪酶抑制剂和作用于中枢神经系统的食欲抑制剂，包括奥利司他(orlistat)胶囊、氯卡色林(lorcaserin)、盐酸芬特明/托吡酯、纳曲酮/安非他酮复方缓释片(contrave)以及利拉鲁肽(liraglutide)注射液，存在大脑中枢和心血管系统等方面的安全不确定性；食欲抑制剂由于可引起神经系统不良反应而被限制使用，胰脂肪酶抑制剂奥利司他通过抑制胰脂肪酶活性，进而抑制食物中脂肪的分解吸收而减肥，但因其会引起脂肪泻，可造成脂溶性维生素缺乏，还有能引起肝功能损害。

目前减肥药疗效弊端、副作用和不良反应包括：必须长期服用、体重反弹。长期食用减肥药会导致人体肠胃功能紊乱、消化不良，引发一系列的胃肠疾病，有些减肥药会导致肾脏功能退化；女性吃减肥药还会导致不孕；另外服用减肥药之后有些人出现过度兴奋，失眠，情绪不稳定、妄想、产生幻觉、等精神疾病症状。而且安非他命还像毒品一样导致上瘾，一旦上瘾，戒掉又很困难，进一步导致焦虑、沮丧、疲倦、嗜睡、暴饮暴食等症状。

发明内容

针对现有的不足，本发明提供一种基因治疗减肥的生物药剂及其制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种基因治疗减肥的生物药剂，包括AAV2、TBG、APOA4，所述AAV2、TBG、APOA4在体外通过基因重组形成能用于静脉注射的基因载体生物药剂。

作为优选，所述APOA4是46kDa的载脂蛋白A4。

作为优选，所述AAV2是腺相关病毒2型。

作为优选，所述TBG是肝脏特异性表达的启动子。

作为优选，所述AAV2的病毒载体是PFD-rAAV-TBG-GFP空质粒。

一种基因治疗减肥的生物药剂制备方法，步骤如下，S1，获取治疗性基因，从正常生物体组织cDNA库扩增APOA4全长cDNA片段，并在该片段两侧增加SpeI和Sa1I酶切位点；S2，在AAV2病毒载体PFD-rAAV-TBG-GFP空质粒上通过SpeI和Sa1I酶切位点将APOA4 cDNA克隆入该质粒制成PFD-rAAV-TBG-APOA4-GFP治疗性质粒；S3，将PFD-rAAV-TBG-APOA4-GFP质粒通过转染、扩增、纯化制成PFD-rAAV-TBG-mAPOA4-GFP基因载体生物药剂。

作为优选，还包括步骤S4，将PFD-rAAV-TBG-mAPOA4-GFP基因载体生物药剂通过生理盐水稀释形成能够静脉注射的生物药剂。

作为优选，所述生物药剂稀释到的浓度为2×10¹⁰vg/ml。