[发明专利]一种间充质干细胞对儿童自闭症临床应用实验方法

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞对儿童自闭症临床应用实验方法，本发明的实验方法从基因表达和血清指标多方面考察间充质干细胞对儿童自闭症的治疗情况的考察，可考察间充质干细胞在自闭症儿童的体内改善和修复血清系列因子水平的作用，为间充质干细胞治疗自闭症提供实践依据，且还可进一步完善其治疗理论，为干细胞的临床应用进一步提供基础。

技术领域

本发明涉及临床应用技术领域，尤其涉及一种间充质干细胞对儿童自闭症临床应用实验方法。

背景技术

孤独症(ASD)是一种定义为复杂的行为障碍以严重和普遍的社会沟通障碍为特点的重复行为。自闭症是最常见的精神病之一。根据美国疾病控制中心最新统计，每59名8岁儿童中就有1名患有该疾病。ASD是一个复杂的以及异质性精神障碍，早期研究表明遗传和先天因素是导致自闭症病因的组成部分。然而，越来越多的证据表明以前的研究可能高估了自闭症的遗传学成分，因为孤独症双胞胎遗传相似，但是环境也共享。同时，全基因组研究也发现了大量的ASD候选基因连锁研究、基因关联研究、拷贝数变异筛选和SNP分析。许多候选基因，如RELN,SH3,SHANK3,NLGN3,NEGN4X,MET,GABRB3,OXTR,SLC6A4,PTEN等都提示与ASD有关。通过表观遗传机制，暴露于环境因素可能是引发ASD发展的原因，环境因素可能导致的自闭症风险的增加的因素包括：母体免疫激活(MIA)；产前或围产期暴露于丙戊酸(VPA)和选择性血清素再摄取抑制剂；早期接触压力；高龄父母，缺锌，褪黑素合成异常以及环境毒素。尤其是MIA和母亲接触SSRI和VPA等药物从临床和动物研究中得出的证据支持免疫功能障碍和炎症是包含在ASD病因中的。

研究表明ASD患者的中枢神经系统存在活跃的炎症。在ASD患者的死后脑和脑脊液样本中发现激活的星形胶质细胞和小胶质细胞增加。此外，来自神经胶质细胞的巨噬细胞趋化蛋白-1和肿瘤生长因子-β1升高是ASD患者脑样本中最突出的细胞因子；而且ASD患者脑脊液中显示出炎症细胞因子谱、巨噬细胞趋化蛋白-1、IL-6、IL-8和IFN-γ显著的表达。另一项研究进一步表明，包括TNF-α、IL-6、IL-8、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和IFN-γ(Th1细胞因子)在内的促炎细胞因子在ASD患者的大脑中显著增加。然而，IL-4或IL-5(Th2细胞因子)没有增加，因此ASD患者Th1/Th2比值显著升高，提示Th1通路在ASD中被激活。

而有大量研究表明间充质干细胞(MSCs)对免疫系统有非常显著的影响。MSCs能够通过抑制促炎活性，抑制树突状细胞成熟，使巨噬细胞向抗炎M2样状态极化，通过IL-10促进调节性T细胞的产生，抑制NK细胞的增殖和细胞毒性，降低B细胞的活化和增殖，从而对适应性和天然免疫系统起作用。ASD患者表现出Th1和Th2之间的不平衡，以及NK细胞，过度产生促炎和减少抗炎。MSCs免疫调节作用有可能恢复这种免疫失衡，抑制TNF-α、IL-1β和IFN-γ的产生，并增加IL-10和IL-4水平。而自闭症患者表现出的Th1和Th2之间的不平衡，以及NK细胞，过度产生促炎和减少抗炎。MSCs免疫调节作用则有可能恢复这种免疫失衡，抑制TNF-α、IL-1β和IFN-γ的产生，并增加IL-10和IL-4水平。

间充质干细胞作为一种成体多功能干细胞，能够自我更新、多向分化，来源广泛，且容易体外分离培养和较低的免疫源性，具有组织损伤修复及免疫调节等作用，这些特性使其在儿童自闭症的治疗中具有潜在的应用价值，然而大部分研究只涉及基础研究和动物试验，到目前为止临床应用间充质干细胞治疗儿童自闭症的相关研究极少，且多数为个案报道。

发明内容

因此，基于以上背景，本发明提供一种间充质干细胞对儿童自闭症临床应用实验方法，通过实验得到的结果，可为间充质干细胞治疗儿童自闭症的推广与应用提供科学的实验依据。

本发明的技术方案为：

一种间充质干细胞对儿童自闭症临床应用实验方法，其实验步骤为：