[发明专利]一种微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法及应用

权利要求书

1.一种微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

将小鼠麻醉，在小鼠身下放置恒温毯，将胸锁乳突肌牵开，暴露颈总动脉和颈分岔；

将磁铁放置于颈总动脉下方，并用钛金属动脉瘤夹暂时夹闭颈外动脉，吸取凝血酶磁珠，注射入尾静脉，所述凝血酶磁珠为羧基化磁珠与凝血酶反应形成的带凝血酶的磁珠，所述凝血酶磁珠聚集于颈总动脉处靠近所述磁铁的位置，在颈总动脉处聚集的凝血酶磁珠与流动的血液形成颈动脉血栓，移去磁铁，镊子轻夹血栓，向上移动；进而形成脑卒中模型；

所述吸取凝血酶磁珠的体积为150ul-160ul；所述恒温毯的温度设置为37±0.2℃；所述颈总动脉血栓形成的时间为3-5min；所述磁铁为圆形，直径为2mm。

2.根据权利要求1所述微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法，其特征在于，所述的凝血酶磁珠的制备方法包括以下步骤：

S1.磁珠活化：将羧基化磁珠通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与N-羟基琥珀酰亚胺试剂混合激活，后放置于2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液中，再进行混匀，得到活化后的磁珠；

S2.凝血酶与活化磁珠链接：将步骤S1中得到的活化后的磁珠用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液清洗，随后加入凝血酶，再进行混匀；

S3.封闭磁珠未连接的羧基：将步骤S2中得到的磁珠放置于磁力架上，移液器弃去上清，同时加入2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液与血清蛋白；

S4.清洗与保存：将步骤S3中得到的磁珠放置于磁力架上，弃去上清，加入磷酸缓冲盐溶液，得到凝血酶磁珠。

3.根据权利要求2所述微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法，其特征在于，在磁珠活化之前对羧基化磁珠进行清洗，羧基化磁珠清洗的方式为：取羧基化磁珠，用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液清洗，再放在磁力架上，将羧基化磁珠聚集于试管底部，再用移液器吸弃上清；所述2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液的pH值为6.5，浓度为0.05mol/L，清洗过程中所述2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液与所述羧基化磁珠的体积比为5:1。

4.根据权利要求2所述微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法，其特征在于，步骤S1中所述羧基化磁珠的粒径为100-120nm，浓度为5mg/ml；步骤S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与所述N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:2；步骤S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与所述羧基化磁珠的质量比为1:9.8-10.2；步骤S1中所述混匀的温度为20-25℃，时间为3-5h。

5.根据权利要求2所述微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法，其特征在于，步骤S2中所述凝血酶与步骤S1中羧基化磁珠的投料比为50-100:200，所述凝血酶以ug计，所述羧基化磁珠以uL计；步骤S2中所述混匀的温度为20-25℃，时间为6-8h。

6.根据权利要求2所述微创可溶栓的脑卒中模型的制作方法，其特征在于，步骤S3中所述血清蛋白与步骤S2中凝血酶的质量比为1000:50-100。