[发明专利]一种检测SARS-CoV-2的引物和探针及其试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴定新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)的引物和探针及其试剂盒。本发明提供的引物探针组合中，包括针对SARS‑CoV‑2的引物、探针。该引物和探针具有良好的特异性，结合real time PCR检测方法，能够实现对SARS‑CoV‑2的快速、准确、灵敏的鉴定。实验表明，本发明的引物探针的检测SARS‑CoV‑2的最低检测限为20copies/ml。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴定SARS-CoV-2的引物探针组合。

背景技术

新型冠状病毒，2020年1月12日被世界卫生组织命名为2019-nCoV，2020年2月11日被国际病毒分类委员会命名为SARS-CoV-2。

SARS-CoV-2具有极强的传染性，主要经呼吸道飞沫传播(喷嚏、咳嗽)和接触传染，主要引起人类呼吸系统感染，感染者常出现发热、乏力、干咳，逐渐出现呼吸困难等症状，多数患者预后良好，部分患者起病症状轻微，无明显发热，严重者出现急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒及出凝血功能障碍等症状，病情危重者可导致死亡。SARS-CoV-2是第7个已报导可感染人的冠状病毒，其余6个分别为HCoV-229E、HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-NL63，HCoV-HKU1及MERS-HCoV。其中HCoV-229E和HCoV-NL63属于α属冠状病毒，HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-HKU1、MERS-CoV与2019-nCoV均为β属冠状病毒。

核酸检测是临床病原学诊断的常用方法，具有灵敏高、特异性强等优点。SARS-CoV-2肺炎疫情发生以来，核酸检测是临床诊断、解除隔离、康复出院的重要诊断依据。基于TaqMan探针法的实时荧光PCR技术具有简单、快速、准确的优势，已广泛应用于临床病原体的检测，在2003年我国爆发的SRAS病毒的疫情控制方面做出重要贡献，是WHO推荐的MERS-CoV病毒检测方法之一，目前实时荧光RT-PCR技术已被列入我国2019-nCoV诊疗指南。中国疾控中心、美国CDC等单位也公布了相应的检测方案，包括引物序列。在全球流感共享数据库(GISAID)中，2019-nCoV的全基因组序列已经超过了三千条，通过序列分析，已公布的这些引物序列都存在或多或少的引物区突变。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供鉴定SARS-CoV-2的引物探针组合，该引物探针组合能够准确、快速、灵敏的实现对SARS-CoV-2的鉴定。

本发明提供的引物探针组合其包括：

包括引物探针组合如下：

如SEQ ID NO.1所示的SARS-CoV-2N基因的上游引物；

如SEQ ID NO.2所示的SARS-CoV-2N基因的下游引物；

如SEQ ID NO.3所示的SARS-CoV-2N基因的特异性探针；

如SEQ ID NO.4所示的SARS-CoV-2ORF1ab基因的上游引物；

如SEQ ID NO.5所示的SARS-CoV-2ORF1ab基因的下游引物；

和如SEQ ID NO.6所示的SARS-CoV-2ORF1ab基因的特异性探针。

本发明中SARS-CoV-2的引物和探针用于对SARS-CoV-2的定性检测。

本发明中，SEQ ID NO.1～2所示引物对扩增的片段如SEQ ID NO:7所示；

如SEQ ID NO.4～5所示引物对扩增的片段如SEQ ID NO:8所示。

本发明中，所述探针的3’端连接淬灭基团，5’端连接荧光基团；其中：