[发明专利]α-L-岩藻糖苷酶OUCJdch-16及其应用

说明书

本发明公开了一种α‑L‑岩藻糖苷酶OUCJdch‑16，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码‑L‑岩藻糖苷酶OUCJdch‑16的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。α‑L‑岩藻糖苷酶OUCJdch‑16在水解pNp‑Fuc/制备二岩藻糖基乳糖中的应用。本发明还公开了包含有编码α‑L‑岩藻糖苷酶OUCJdch‑16的基因的重组表达载体、重组宿主。本发明的α‑L‑岩藻糖苷酶OUCJdch‑16具有一定的嗜冷性，其在25～45℃下均具有较高的酶活性，因而其可在较广的温度范围内实现工业应用。此外，液相结果表明，OUCJdch‑16在最适反应条件下具有更高的转化率，具有良好的生物催化合成效率。

技术领域

本发明涉及α-L-岩藻糖苷酶OUCJdch-16及其应用，属于功能酶技术领域。

背景技术

二岩藻糖基乳糖是一种由α(1→2)糖苷键连接L-岩藻单糖和D-乳糖组成的人乳低聚糖，具有调节肠道菌群和免疫系统发育、抵抗病原菌的黏附、促进神经系统发育和修复以及提高艾滋病毒感染婴儿存活率等生理活性，这使得二岩藻糖基乳糖在医药、保健品、食品、农业等领域有了更大的应用价值，因此大量合成二岩藻糖基乳糖具有重要意义。

目前，二岩藻糖基乳糖的制备方法主要有天然提取、化学法、生物酶法。婴儿主要从母乳中获取二岩藻糖基乳糖，但是由于母乳中的含量不仅与母亲血型有关，还会在产后的前三个月不断下降，因此不能从母乳中大量提取。而化学合成法步骤多，纯化难，产品收率低，成本高昂，且合成过程涉及有毒试剂。相比之下，生物合成具有区域特异性、专一性好，能实现靶向生产，产物单一易纯化，反应条件温和，安全无毒等优点，所以生物合成二岩藻糖基乳糖是一种经济可行的方法。岩藻糖苷酶可以利用底物pNp-岩藻糖和乳糖合成二岩藻糖基乳糖，但野生型菌株产酶水平低，难以满足工业生产和应用的要求，可采用异源表达提高产酶水平，制备酶制剂，用于工业化生产。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种α-L-岩藻糖苷酶OUCJdch-16，其可以降解pNp-Fuc，将水解的岩藻糖基转移到乳糖上产生二岩藻糖基乳糖。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种α-L-岩藻糖苷酶OUCJdch-16，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

MKIVQRLSILILVTILNVNTGIAQNKSQKDKLSDDERMAWWRDSKFGMFIHWGAYSIIGGERGTKIAGGGAEWAMDKLDYTIEDYEKFPKMFNPQLFDADAWVTMAKNAGMKYIVLTSKHHEGFALWDSKVSKYDIMDTAPFKRDIVKELAEACKKQGIKFCLYYSIVDWHHPQAQGNLYPNYNISQHDDPSVVNPDFPKYYQNYMKPQVGELLKNYGDIGVVWFDGDWISDYTTEMGKDLYKYIRDIQPNTIVNNRVDKGRTGMDGMNNKPGQFAGDFGTPEQEIPDTGIDTDWEACMTMNGTWGYKPSDNKWKSSEDLIQKLVDIVSKGGNFLLNIGPDGFGRFPAESIRRLEAMGEWTKKNGEAVYGASASPYEKPSWGRYTKKDGVVYAHVFEWPKDGLLKLNKEIKIKKATVLTNPNTVLKSIATSAEVLLDIPMLAPDATVTVIKIELAK。

编码上述α-L-岩藻糖苷酶OUCJdch-16的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：