[发明专利]一种氨基酸序列、蛋白质及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种氨基酸序列、蛋白质及其制备方法和应用。本发明提供了上述氨基酸序列在制备肺炎支原体抗原或制备包含肺炎支原体抗原的产品中的应用，所述氨基酸序列包括(a)如SEQ ID No.1所示氨基酸序列或(b)所述氨基酸序列包括与SEQ ID No.1所示氨基酸序列具有88％以上同源性；并且所述氨基酸序列不包含SEQ ID No.2所示序列。本发明提供的SEQ ID No.1所示氨基酸序列或其等同功能序列编码的蛋白质，不具有跨膜区，易生产，灵敏度高，特异性强。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种氨基酸序列、蛋白质及其制备方法和应用。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae，MP)是人类呼吸道感染的重要致病菌之一，感染肺炎支原体可引起轻度的咽喉炎、支气管炎、重症间质性肺炎(原发性非典型肺炎)及神经系统、心血管系统并发症等。

目前常规的肺炎支原体检测方法包括培养法、PCR检测以及血清学诊断。肺炎支原体生长缓慢，培养法不能满足临床快速诊断的需求。PCR方法虽然提高了检测的灵敏度，但需要规范的操作和严格的质量控制，否则易出现非特异性反应。临床常用的方法仍多为血清学诊断，国内外常用的血清学诊断试剂盒所用抗原为肺炎支原体全菌体或其细胞膜碎片成分，由于肺炎支原体全菌体或其细胞膜碎片成分中的糖酯成分与部分细菌及人体组织存在交叉反应，故特异性较低。

目前国内较为常用的标准化的试剂盒为日本进口的SERODIA—MYCOⅡ试剂盒及美国进口的EIA检测试剂盒，抗原成分主要为肺炎支原体细胞膜碎片抗原，这些试剂盒成本较高，而且易出现非特异交叉反应。

制备肺炎支原体免疫诊断试剂盒的一个关键问题就是必须获得高纯度，高免疫原性的检测抗原，现急待寻找特异性高的肺炎支原体抗原用于血清学肺炎支原体诊断。

P30蛋白是锚定于MP细胞膜上的重要黏附蛋白，包含275个氨基酸残基，相对分子质量约为29.7Kd，其基因序列全长825bp。研究显示P30蛋白可以激起宿主的免疫反应，是除了黏附蛋白P1外的另一个重要的黏附素和免疫原。Varshney等(Varshney AK,Chaudhry R,Kabra S K,et al.Cloning,expression,and immuNological characterization of theP30 protein of Mycoplasma pneumonia[J].Clin Vaccine ImmuNol.2008,15(2):215-220.)克隆表达了P30抗原，但由于P30抗原采用的基因为野生型基因，表达量较低，限制了其在诊断和疫苗研制中的应用。黏附蛋白P30粘附在细胞膜上，部分多肽序列嵌入膜的疏水区，脂溶性强；其经大肠杆菌重组菌诱导表达后存在于包涵体中，膜蛋白的纯化工艺繁杂，产量低，难以实现工业化生产，且黏附蛋白P30的灵敏度、特异性均有待提升。

基于上述分析，特提出本发明。

发明内容

本发明的首要目的在于，提供一种对肺炎支原体抗体具有特异性识别功能的氨基酸序列，并以该氨基酸序列为核心构建易于表达纯化的、具有高灵敏度和特异性的，适于工业化生产的蛋白质，以解决目前肺炎支原体抗体检测中面临的技术问题。

本发明的第二个目的在于，对上述氨基酸序列编码的多肽进行保护性修饰，以使该多肽能够满足工业化生产的要求。

本发明的第三个目的在于，对上述氨基酸序列编码的蛋白质进行保护性修饰，以使该蛋白能够满足工业化生产的要求。

本发明的第四个目的在于，提供编码上述蛋白质的核酸分子，以及进一步利用该核酸分子构建的生物材料，来实现上述蛋白质的高效表达。

本发明的第五个目的在于，提供上述蛋白质的制备方法，以获得上述蛋白质。