[发明专利]增强Subtilisin基因转录水平以提高TG酶发酵水平的方法

权利要求书

1.一种高产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，在保藏编号为CCTCC NO:M 2020196的茂源链霉菌IPIO中过量表达来源于茂源链霉菌IPIO的序列如SEQ ID NO.1所示的Subtilisin编码基因SMDS_5092。

2.一种用于过量表达Subtilisin编码基因的整合型质粒载体，其特征在于，所述载体包含源于保藏编号为CCTCC NO:M 2020196的茂源链霉菌IPIO的序列如SEQ ID NO.1所示的Subtilisin编码基因SMDS_5092。

3.一种根据权利要求2所述的整合型质粒载体的构建方法，其特征在于，通过PCR扩增得到Subtilisin编码基因的PCR片段，通过酶切连接的方法连入整合型质粒pDR3-K*的NdeI/EcoRI位点。

4.一种高产谷氨酰胺转氨酶的茂源链霉菌菌株，其特征在于，将如权利要求2所述的整合型质粒载体，或如权利要求3所述的方法构建得到的整合型质粒载体接合转移导入保藏编号为CCTCC NO:M 2020196的受体菌茂源链霉菌IPIO中进行重组获得所述菌株。

5.一种提高谷氨酰胺转氨酶产量的方法，其特征在于，在保藏编号为CCTCC NO:M2020196的茂源链霉菌IPIO中过量表达来源于茂源链霉菌IPIO的序列如SEQ ID NO.1所示的Subtilisin编码基因SMDS_5092获得过量表达突变株，发酵，获得谷氨酰胺转氨酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵包括以下步骤：将活化后的过表达突变株孢子接种于种子培养基中，30°C、200-220 rpm条件下培养24 h，按10%接种量转接至发酵培养基中，30°C、200-220 rpm的条件下发酵26-28 h；收集发酵液进行酶活检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述种子培养基包括甘油1-3w/v%，酵母提取物0.4-0.8w/v%，鱼粉蛋白胨1-3w/v%，MgSO₄•7H₂O 0.1-0.3w/v%，K₂HPO₄•3H₂O 0.1-0.3w/v%；

所述发酵培养基包括甘油1-3w/v%，酵母提取物0.4-0.8w/v%，鱼粉蛋白胨1-3w/v%，MgSO₄•7H₂O 0.1-0.3w/v%，K₂HPO₄•3H₂O 0.1-0.3w/v%，发酵促进剂0.1-0.4w/v%。