[发明专利]一种巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型及其构建方法

说明书

本发明提供了一种巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型及其构建方法，该构建方法包括：通过向NSG小鼠回输G‑CSF动员的人外周干细胞构建初始模型；其中，所述G‑CSF动员的人外周干细胞的输入量为1×10⁶/只；待所述人外周干细胞植活后，向所述初始模型中注射巨细胞病毒，得到稳定的巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型。通过本发明提供的构建方法，可减少GVHD的发生，为后期基于该模型的实验研究提供了稳定的场所；同时人外周干细胞的植活周期较短，大大地缩减了建模周期，加快了后期基于该模型的实验研究进度，因而，本发明提供的建模方法具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程与遗传修饰领域，特别是涉及一种巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型及其构建方法。

背景技术

巨细胞病毒(Cytomegalovirus，缩写为CMV)属于Beta-疱疹病毒家族，是人疱疹家族中体积最大，最复杂的病毒。一般情况下，CMV在人群中广泛传播，部分地区感染阳性率可达90％，首次感染后可终身潜伏。CMV的激活成为免疫缺陷患者死亡的主要原因。

小鼠依靠其与人类基因组高度同源，近交系多，繁殖周期短，易饲养，成为人类疾病动物模型的首选。然而，由于CMV具有严格的种属特异性，以往的研究主要以鼠巨细胞病毒(MCMV)感染小鼠为主要手段，而MCMV和HCMV在基因组、病毒结构和功能上存在差异。因此，利用小鼠进行人巨细胞病毒(HCMV)的致病机理及治疗等相关研究受到了极大的限制。

近年来，人源化小鼠模型的建立为仅能以人为宿主的病毒的研究提供了新的思路。IL-2受体γ链缺陷(IL2γc-/-)的免疫缺陷小鼠具有NK、T、B细胞缺陷的特性，能允许人造血前体细胞在体内更新、增殖、稳定持久存在，因此广泛用于人源化小鼠模型的建立。其中给NOD-CgPrkdc Il2rgtm1Wjl(NSG)小鼠回输人的CD34+造血干细胞或外周血单个核细胞，已被越来越多应用于人源化小鼠模型的构建。

然而，现有的人源化小鼠模型的构建方法，及以此为基础的CMV感染模型还存在一系列问题。例如，一种方法是给NSG小鼠回输CD34+脐血干细胞，待干细胞植活后用HCMV感染小鼠，并在感染4周后注射粒细胞集落刺激因子(G-CSF)以动员造血干细胞，同时促进病毒扩散，动员时间持续一周。该方法建模周期长，从干细胞移植到小鼠组织检测到CMV感染约需10周，且在小鼠干细胞移植后6到8周才能够在小鼠外周血中检测到人的细胞约2-7％，且脐血来源十分有限。Morgan Hakki等人将上述方法进行简化，给NSG小鼠移植G-SCF动员的HCMV血清阳性供者外周干细胞(PBSC)2*10⁶/只，约6-8周后可在小鼠脏器中检测到少量HCMV DNA，然而在PBSC移植后1周小鼠易出现严重的移植物抗宿主病(GVHD)表现，并引起死亡。而减少剂量则降低了病毒的复燃率。因此该方法稳定性较差，受限于剂量且无法保证小鼠的生存。

因此，针对巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型，本领域亟需一种新的构建方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型及其构建方法，通过该构建方法，可以实现巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型的快速构建，同时减少了由GVHD造成的死亡，且建模后能稳定地检测到CMV感染。本发明的内容具体如下：

第一方面，本发明提供了一种巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型的构建方法，所述构建方法包括：

通过向NSG小鼠回输G-CSF动员的CMV血清学阳性供者的外周干细胞构建初始模型；其中，所述外周干细胞的回输量为1×10⁶/只；

待所述人外周干细胞植活后(移植后2周)，向所述初始模型中注射巨细胞病毒，得到稳定的巨细胞病毒感染的人源化小鼠模型。

可选地，所述NSG小鼠为辐照后6～12小时的NSG小鼠；