[发明专利]一种美洲大蠊小肽修复受H2

说明书

本发明公开了一种美洲大蠊小肽修复受H₂O₂氧化损伤的猪卵巢原代颗粒细胞模型的构建方法。所述方法包括：猪卵巢颗粒细胞的采集和培养；猪卵巢颗粒细胞氧化应激模型的建立；美洲大蠊小肽对H₂O₂氧化处理的猪卵巢颗粒细胞的修复作用。本发明建立了猪卵巢颗粒细胞氧化应激模型，为此方面的研究奠定基础；另外，寻找能够提高猪卵巢功能的抗猪氧化应激的活性物质，并探讨其作用机制，为下一步在猪场的应用提供坚实的理论基础。

技术领域

本发明涉及细胞分子领域，具体涉及一种美洲大蠊小肽修复受H₂O₂氧化损伤的猪卵巢颗粒细胞模型的构建方法。

背景技术

保山猪(生活区海拔2600m)适应性较强、肉质细嫩、香味浓郁，是生产火腿腊肉的优质原料，是云南最具开发潜力的地方优良肉脂兼用型猪种。2011年，该猪种被载入《中国畜禽遗传资源志－猪志》，拥有省级保种场－保山种猪场。但是，保山猪产仔数较少。现在保山猪按照洋猪营养水平和养殖模式进行饲养，长期受到日粮高蛋白、低纤维、限位栏束缚以及高海拔等营养和环境方面的应激可能是保山猪产仔数低的主要原因之一。

母猪的繁殖效率依赖于排出的卵子的数量和质量。颗粒细胞可以向卵母细胞提供营养物质，传递信号，促进卵母细胞的成熟，提高卵子的质量。卵泡闭锁是卵泡发育过程中正常的生理现象，但是，异常的卵泡闭锁将会降低可用卵泡的数目，减少排卵数，进而减少猪的产仔数。颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要原因，氧化应激能诱导猪卵巢颗粒细胞的凋亡。因此，寻找一种能够显著抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的修复物质是改善其繁殖效率的重要途径。

过氧化氢(H₂O₂)致猪卵巢颗粒细胞氧化损伤是研究氧化应激的重要方法，但在保山猪上未见报道，其模型制作所需H₂O₂的浓度和作用时间有待研究。

美洲大蠊(periplaneta americana)俗称蟑螂，原产于南美洲，是世界性卫生害虫，但其药理作用却日益造福人类。美洲大蠊最早应用于《神农本草经》，具有组织修复、抗肿瘤、增强免疫及保护肝功能等作用。其成分复杂，含有多种氨基酸、多糖、蛋白质和神经肽等。目前，大理大学已经利用美洲大蠊分离出抗病毒、强心等活性成分，制成能增强免疫的创面修复剂“康复新液”，治疗乙型肝炎新药“肝龙胶囊”和治疗心力衰竭新药“心脉隆注射液”。美洲大蠊小肽(PAP)作为美洲大蠊精提物，成分主要为0.181-12.355KDa的小肽，课题组发现其具有显著的组织修复作用，但在生殖方面的效果未见报道。

本项目首先建立保山猪卵巢颗粒细胞氧化应激模型，探讨美洲大蠊小肽对该细胞的氧化应激修复效果及其作用机制。

发明内容

为此，本发明提供一种美洲大蠊小肽修复受H₂O₂氧化损伤的猪卵巢颗粒细胞模型的构建方法，为此方面的研究奠定基础；另外，寻找能够提高猪卵巢功能的抗猪氧化应激的活性物质，并探讨其作用机制，为下一步在猪场的应用提供坚实的理论基础。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明一方面提供的一种美洲大蠊小肽修复受H₂O₂氧化损伤的猪卵巢颗粒细胞模型的构建方法，所述构建方法包括：

步骤一，猪卵巢颗粒细胞的收集和培养

收集猪卵巢细胞颗粒细胞，并对颗粒细胞进行原代培养和传代培养，传代培养24-48h后进行氧化应激模型的建立；

步骤二，猪卵巢颗粒细胞氧化应激模型的建立