[发明专利]用于KIR基因分型的引物、试剂盒及方法

说明书

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种用于KIR基因分型的引物组合、含有该引物组合的试剂盒以及采用该引物组合或试剂盒对KIR基因进行分型的方法。采用本发明的引物组合，使用16个扩增管即可扩增KIR基因的全部位点，并且在外显子参考序列完整的情况下，可对依靠外显子序列即可区分的所有型别进行检测。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及用于KIR基因分型的引物、试剂盒及方法。

背景技术

器官移植是将健康器官移植到受者体内，代替因致命性疾病而丧失功能的器官，并使之迅速恢复功能。骨髓移植是将正常骨髓由静脉输入患者体内，取代病变骨髓，重建患者的造血功能和免疫功能，达到治疗以白血病为首的多种血液病的目的。在骨髓或器官移植中，排斥反应一直是影响移植物存活的主要因素。长期以来，医学界普遍认为在排斥反应中对识别异体抗原起决定性作用的是人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)。然而，随着研究的不断深入，发现部分HLA基因型完全匹配的病人仍出现移植物排斥的现象。因此，除了HLA相合与否外，自然杀伤细胞(nature killer cells,NK)表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulin Ig-like receptor,KIR)家族日益受到关注。

KIR受体家族目前已知的有17个成员，分为活化性受体S型和抑制性受体L型，分别为KIR2DL1-4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DS1-5、KIR3DL1-3、KIR3DS1以及假基因KIR2DP1和KIR3DP1。KIR基因家族在基因数量上存在单倍型差异，个体基因间存在等位基因多态性。KIR基因的多样性主要表现为：(1)不同的NK细胞克隆及不同的个体间KIR基因数目存在差异，不同的个体可表现为不同的单倍型；(2)同一KIR基因位点有多种不同的等位基因，其中大多数为非同义突变。因此，KIR基因组成的多样性以及等位基因的多态性使得接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的供者和受者即使在HLA-I类和II类位点全相合的情况下，KIR分型也很可能不同。人类KIR单体型共有两种：A型和B型，其组成和分布在不同人种和不同个体间存在很大的差异，B单体型包含多种B特征性基因(KIR2DL2，2DL5，2DS1，2DS2，2DS3，2DS5或3DS1)的不同组合。A单体型的多态性主要体现为等位基因多态性；而B单体型则主要体现为基因构成的多态性，其基因种类和数目在不同个体间存在较大差异，而等位基因水平的差异相对较小。

研究表明，KIR基因型及单体型在allo-HSCT中起着一定的作用。对于中国汉族人群来说，选择存在B单体型的供者(A/B或B/B，统称B/x)有助于提高异基因造血干细胞移植后的总体生存率(overall survival,OS)。

KIR受体表达在NK细胞和T细胞上，配体为MHC-I类分子。其相互作用在固有免疫和适应性免疫均发挥重要作用。KIR和MHC-I类分子由不关联的多态性基因家族编码。KIR及MHC-I类分子的多种组合可以影响机体的抗感染免疫，自身免疫病和各种妊娠并发症及造型干细胞移植预后。这些相关性提示了KIR及MHC-1分子的多态性在人类进化的过程中可能起到促进人类在流行性感染中的存活及影响人类繁殖及人口增长的重要作用。

因此，在骨髓或器官移植前需确定供受者的KIR型别，可以评估受体对潜在供体产生排斥反应的风险，在兼顾HLA型别的情况下，避免选择排斥风险高的供体。

然而，目前存在的利用测序(sequence based typing,SBT)进行KIR分型的方法成本较高，且操作繁琐，时间冗长。因此，目前亟需一种快速、准确、成本经济的对KIR基因进行分型的方法。

发明内容

本发明针对临床亟需一种快速、准确、成本经济的对KIR基因进行分型的方法，提供了一整套用于KIR基因分型的引物、试剂盒及方法。本发明的分型方法简便、准确、覆盖型别广。

为此，本发明一方面提供了一种用于KIR基因分型的引物组合，其由SEQ ID NO.1-39所示的引物组成。