[发明专利]一种苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物的制备及在检测丙二醛中的应用

说明书

本发明提供了一种苯甲酰肼‑萘二甲酰亚胺类衍生物的制备及在检测丙二醛中的应用。本发明苯甲酰肼‑萘二甲酰亚胺类衍生物是以1,8‑萘二甲酰亚胺为荧光团，酰肼作为识别基团，引入叶酸配体，使其具有高效靶向性，可定量检测丙二醛（MDA）。此外，在检测位点的邻位引入硝基，增加酰肼与MDA之间的反应活性。酰肼与MDA之间的特异性反应，使得苯甲酰肼‑萘二甲酰亚胺类衍生物对MDA的选择性极高，对其他活泼的醛类，以及自由基和常见的金属离子均无响应。依据苯甲酰肼‑萘二甲酰亚胺类衍生物自身特点，只有在丙二醛分子（第一把钥匙）和生理环境（第二把钥匙）同时存在的情况下，探针分子（锁）才会发生荧光增强现象，可应用于丙二醛的精准检测及相关疾病的诊治。

技术领域

本发明涉及一种苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物及其制备方法，本发明同时还涉及苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物在水环境和细胞中检测丙二醛的应用，属于化学合成领域和生物材料领域。

背景技术

丙二醛（MDA），是脂质过氧化的标志性产物之一，在生物体内的含量可以直接反映生物体被氧化的程度或损伤的程度。近现代生物医学研究表明，体内的MDA含量的变化通常与某些疾病的发生、发展密切相关，例如：癌症，糖尿病，高血压，白血病，心血管疾病和肝脏疾病等。因此，开发一种灵敏，简便的方法检测生物体内的MDA的含量在研究疾病的病理过程中具有重要意义。

目前，已有诸多的检测方法应用于丙二醛的检测中，但这些检测方法大多由于检测条件苛刻而仅能应用在体外样品中的丙二醛检测，在检测过程中还需要依赖于高效的分离手段，才能获得良好的检测效果。而利用小分子荧光探针对丙二醛进行检测则可以很好的避免上述问题，并且分子荧光探针与荧光成像技术的连用可以直接监测细胞及活体内的丙二醛。但选择性检测丙二醛的荧光探针的发展情况并不理想，其存在的问题主要体现在体系复杂，响应速度慢，灵敏度低，具有较低的选择性，无法达到应有的检测效果。因此，亟需设计合成针对检测丙二醛的荧光探针，以期达到对相关癌症早期预测与诊断的目的。

发明内容

本发明的目的是提供一种苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物及其制备方法；

本发明的另一个目的是提供苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物在水环境中检测MDA的应用；

本发明的还有一个目的是提供苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物在细胞中检测MDA的应用。

一、苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物及其制备

本发明提供的苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物，其结构式如下：

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本发明提供的苯甲酰肼-萘二甲酰亚胺类衍生物的制备方法，包括以下步骤：

（1）将叶酸和无水三氟乙酸酐溶于四氢呋喃溶液中，于室温下反应10~12 h，反应完全后加入冰水混合物并用乙醚萃取，合并有机相，将溶液旋干，干燥后得淡黄色粉末；最后将其溶解于DMF溶液中，加入K₂CO₃调pH至5.0~7.0，并加入保护剂NH₂NHCOOC(CH₃)₃，使其在室温下搅拌30~50 min后加入三氟乙酸进行酸化，用水和乙醚洗涤，经柱层分离纯化即得叶酸衍生物。其中，叶酸和无水三氟乙酸酐的摩尔比为1:2.5~1:5。

（2）将叶酸衍生物和4-溴-1,8-萘二甲酸酐溶于乙醇溶液中，于75~80℃下回流4~6h，冷却至室温，洗涤，过滤得基于叶酸的4-溴-1,8-萘二甲酰亚胺类化合物。其中，4-溴-1,8-萘二甲酸酐和叶酸衍生物的摩尔比为1:1.2~1:3。