[发明专利]一种南药广霍香的组培快繁方法

权利要求书

1.一种南药广霍香的组培快繁方法，其特征在于：具体步骤如下：

步骤一：材料的选择和准备：以生长健壮、无病虫害的优良广藿香嫩茎及嫩叶片作为外植体；

步骤二：外植体的消毒处理：将采回的广藿香幼嫩叶片用自来水冲洗10-20min，再用浓度为10％的洗洁精水溶液冲洗2-4次，每次3-5min，后在超净工作台上用浓度为75％的乙醇消毒10-12s，倒去乙醇消毒液，后将外植体继续放入消毒液中浸泡消毒8-12min，倒去消毒液，再用无菌水漂洗5-8次，把残留的氯化汞漂洗干净，沥干水备用；

步骤三：培养基的配备：

基本培养基的配备：以MS培养基为基础，加入6-BA2.0mg/L，IBA0.1mg/L，添加3％蔗糖和0.8％琼脂，调整pH值至5.8，制成基本培养基；

愈伤组织诱导培养基的配备：将MS无机盐、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素1.0mg/L、盐酸吡哆素0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、6BA0.05-0.3mg/L和浓度为1-2％的蔗糖混合制成愈伤组织诱导培养基；

芽诱导培养基的配备：将MS无机盐、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素1.0mg/L、盐酸吡哆素0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、6-BA0.05-0.3mg/L、浓度为3-3.5％的蔗糖和浓度为0.7％的卡拉胶混合制成pH为5.8的芽诱导培养基；

壮苗生根培养基的配备：将1/2MS无机盐、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素1.0mg/L、盐酸吡哆素0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、香蕉汁15％、浓度为2.5-3％的蔗糖和浓度为0.75％的卡拉胶混合制成壮苗生根培养基；

步骤四：外植体的接种转接：在超净工作台上先切去外植体嫩枝两端及叶柄先端，然后将剩余部分切成1.2-2.1cmx0.45-0.55cm的小段，每段含1-2节，将小段的植体转接到愈伤组织诱导培养基上，诱导出愈伤组织后，将其切成0.5cmx0.5cm的小块转接到芽诱导培养基上，将外植体叶片切成1.5-1.8cmx0.40-0.45cm的小块转接到基本培养基上，待到植体出芽后，将外植体转接到壮苗生根培养基内，在外植体接种后，使培养基均置于培养室内；

步骤五：炼苗与移栽：待试管苗根长1.5cm左右时，用镊子将试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去粘附的培养基，勿伤苗体，浸人1.2g/L的多菌灵水溶液中20min，然后进行炼苗后移栽到混合基质中，移栽后，第1周将温度控制在25℃空气相对湿度控制在80％-90％；第2周温度为23℃，空气相对湿度控制在70％-80％；第21d温度为18-20℃，空气相对湿度控制在60％-70％，则移栽成活率达到95-99％；

步骤六：水肥和病虫害管理：在移栽初期每周喷1次1.2g/L多菌灵水溶液。移栽21d后，组培苗开始长出新叶，发出新根，50-65d左右苗高可达23-27cm左右，叶片在8-11对，即可出圃进行大田种植。

2.根据权利要求1所述的一种南药广霍香的组培快繁方法，其特征在于：在步骤二中消毒液为在浓度为0.1-0.15％的氯化汞溶液中加1-3滴聚山梨酯-80制成。

3.根据权利要求1所述的一种南药广霍香的组培快繁方法，其特征在于：在步骤四中每个愈伤组织诱导培养基和基本培养基上均接种35-40个外植体，每个芽诱导培养基和壮苗生根培养基上均接种17-20个外植体。

4.根据权利要求1所述的一种南药广霍香的组培快繁方法，其特征在于：在步骤四中配制好的培养基均在压力为0.105MPa，温度为121℃的环境中灭菌15-30min后备用。

5.根据权利要求1所述的一种南药广霍香的组培快繁方法，其特征在于：在步骤四中培养室温度为23-26℃、光照强度为1800-2000lx、光照时间为12-14h/d培养室顶部覆盖有75-80％的遮阳网。

6.根据权利要求1所述的一种南药广霍香的组培快繁方法，其特征在于：在步骤五中混合基质由比例为3:3:2:2的泥炭土、椰糠、谷壳和珍珠岩混合而成。

7.根据权利要求1所述的一种南药广霍香的组培快繁方法，其特征在于：在步骤五中炼苗为在光照强度为1100-1500lx的自然光下暴晒5-7d，当叶片呈深绿色、苗木比较健壮时准备移栽。