[发明专利]抗H10亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体ZJU10-01及其应用

说明书

本发明提供抗H10亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体ZJU10‑01及其应用。抗H10亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体ZJU10‑01的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。对该单克隆抗体进行进一步的理化性状分析和鉴定，并建立了以该单克隆抗体为探针通过胶体金免疫层析试纸条和酶联免疫吸附法检测H10亚型禽流感病毒的方法。本发明为临床样本中H10亚型禽流感病毒感染的辅助诊断提供了有效的工具，并可推广应用于多种检测技术以及临床和实验研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗H10亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备及应用，是利用细胞工程、抗体工程技术，获得分泌抗血凝素蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，通过同品系的小鼠诱导腹水，制备抗血凝素蛋白的单克隆抗体ZJU10-01，鉴定为IgG1、κ型，再通过亲和纯化、免疫方法等技术实现对该抗体的应用。

背景技术

H10亚型禽流感病毒1949年在德国的鸡中首次分离出来。长期以来，H10亚型禽流感病毒在动物中持续传播。虽然人类感染禽流感病毒的情况并不多见，但是通过与受感染的禽类直接接触或通过受污染的环境也会发生零星感染。

禽流感病毒通常在家禽和野生鸟类中传播。其中，H5和H7亚型通常是高致病性禽流感病毒，而其他亚型是低致病性禽流感病毒。H10亚型禽流感病毒因其在人类中的具有潜在流行威胁而备受关注。近年来，H10 亚型禽流感病毒越来越多地从禽类中分离出来，例如H10N1、H10N2、H10N3、H10N4、H10N5、H10N6、H10N7、 H10N8和H10N9。H10亚型禽流感病毒可以在哺乳动物之间传播并引起人类的零星感染。目前，H10亚型禽流感至今仍在鸟类中持续传播，对人类健康是一个巨大的潜在威胁。

经典的流感病毒的检测方法是是通过病毒分离。近年来，分子检测方法也得到了极大发展，实时定量聚合酶链反应已被广泛用于流感病毒感染的实验室诊断。然而，这些方法对技术和实验室要求很高并且耗时。由于单克隆抗体技术的发展，基于单克隆抗体的检测方法也被广泛使用于病毒检测，如抗原捕获酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析试纸条。上述方法具有快速、灵敏、廉价的优势，这能促进更早更广泛的发现H10 亚型禽流感病毒，控制疫情扩散。

综上所述，开发H10亚型禽流感病毒单克隆抗体，建立快速灵敏检测方法的对于病毒的防控具有重要的意义。基于以上背景，本项目选定H10亚型禽流感病毒血凝素蛋白为靶抗原，采用融合杂交瘤技术建立稳定分泌抗血凝素蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并大量制备、纯化和鉴定这些单克隆抗体。该单克隆抗体的成功获得，为建立新型的H10亚型禽流感病毒诊断方法——基于免疫学技术的诊断奠定物质基础。同时对疾病发病机理、预后及疗效判定等方面的研究起到重要作用。

本发明用到杂交瘤细胞技术。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，以建立分泌均质抗体的杂交瘤细胞系，也称为单克隆抗体技术。该技术涉及到动物免疫、细胞培养、细胞融合、细胞克隆培养和免疫测定等一系列方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗H10亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体，能识别H10亚型禽流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型，命名为ZJU10-01，能特异性识别禽流感病毒的血凝素蛋白。

抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2(DNA序列如SEQ ID No.1)，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4(DNA 序列如SEQ ID No.3)。

SEQ ID No.1

Heavy chain:DNA sequence(351bp)

Signal sequence-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4