[发明专利]一种壳聚糖酶及其突变体在制备壳寡糖中的应用

说明书

本发明提供一种壳聚糖酶突变体及其在制备壳寡糖中的应用，所提供的突变体相比于出发壳聚糖酶具有更好的温度耐受性和pH值应用范围，从而使提供的壳聚糖酶突变体能应用于实际生产。本发明首先提供一种壳聚糖酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2；本发明再一个方面提供一种壳聚糖酶突变体，其氨基酸序列为SEQ ID NO:4。本发明的壳聚糖酶突变体与出发蛋白酶相比具有更高的温度耐受性与更高的催化效率，具有更好的工业应用前景。

技术领域

本发明属于功能基因改造技术领域，具体涉及一种壳聚糖酶及其突变体在制备壳寡糖中的应用。

背景技术

壳寡糖，又叫壳聚寡糖、低聚壳聚糖，是将壳聚糖经特殊的生物酶技术或化学降解、微波降解技术降解制备得到的一种聚合度在2～20之间寡糖产品，是水溶性较好、功能作用大、生物活性高的低分子量产品。其更低的分子量、更好的溶解性使得壳寡糖相较壳聚糖有着更为广泛的应用。此外，壳寡糖还具备抗肿瘤、降血压、增强免疫力等独特的药理功能活性，壳寡糖具有抑制植物病原菌的生长，诱导高等植物体内产生相关抗体等功能；报道还发现壳寡糖对动物肿瘤细胞也有抑制效果，这使得壳寡糖在医药、保健品、食品、养殖等领域有了更大的应用价值。

壳聚糖能被脂肪酶、蛋白酶、碳水化合物分解酶等多种酶水解；包括非专一性酶类：脂肪酶、蛋白酶、碳水化合物分解酶等，能将壳聚糖水解成聚合度低的壳寡糖。但是非专一性酶类水解到一定程度时，加大酶量也难以提高水解程度，而且水解产物较复杂、难以分离。

目前主要从细菌和真菌细胞中分离能够制备壳寡糖的壳聚糖酶但从自然界分离的蛋白酶虽然存在降解壳聚糖制备壳寡糖的效果，但还存在降解效率低，难以实际应用的问题。

发明内容

本发明提供一种壳聚糖酶突变体及其在制备壳寡糖中的应用，所提供的突变体相比于出发壳聚糖酶具有更好的温度耐受性和pH值应用范围，从而使提供的壳聚糖酶突变体能应用于实际生产。

本发明首先提供一种壳聚糖酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2；

用于编码本发明的壳聚糖酶的核酸片段，其一种序列为SEQ ID NO:1。

本发明再一个方面提供一种壳聚糖酶突变体，其氨基酸序列为SEQ ID NO:4；

用于编码上述壳聚糖酶突变体的核酸片段，其一种序列为SEQ ID NO:3。

本发明还提供一种重组表达载体，所述的重组表达载体上插入有上述的编码壳聚糖酶突变体的核酸片段；

本发明的壳聚糖酶用于降解壳聚糖来制备壳寡糖。

本发明的壳聚糖酶突变体与出发蛋白酶相比具有更高的温度耐受性与更高的催化效率，具有更好的工业应用前景。

附图说明

图1：菌株chi-19-03株的照片图；

图2：壳聚糖酶chiase1903的最适温度检测图；

图3：壳聚糖酶chiase1903的pH检测图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1：扩增原始壳聚糖酶基因

一、筛选壳聚糖酶产生菌