[发明专利]一种抗PD-1的纳米抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种抗PD‑1的纳米抗体及其应用。该抗体至少具有重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3之一，该抗体可用于检测人体外周血中的可溶性PD‑1。本发明通过噬菌体展示技术获得了靶向PD‑1的纳米抗体，该抗体能够以高亲和力特异性识别PD‑1。

技术领域

本发明涉及一种抗PD-1纳米抗体及应用，属于生物技术领域。

技术背景

程序性死亡受体-1(programmed cell death-1，PD-1)及其配体(programmeddeath-1 ligand，PD-L1)分子是肿瘤免疫逃逸及免疫耐受过程中的关键性因素。靶向于PD-1/PD-L1通路的免疫治疗虽然获得了巨大成功，但目前尚未找到确切的疗效预测指标，筛选出最获益的治疗群体。PD-1存在膜性和可溶性(sPD-1)两种形式，由于可溶形式存在的分子，使PD-1/PD-L1通路无论是在组成还是功能方面都更加的复杂多变，因此动态监测血液中sPD-1的变化过程可能会帮助我们更准确的判断患者的免疫状态及预测疗效，筛选最佳治疗人群。

纳米抗体是在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术研发得到的，其分子量约为15KD，是目前已知最小的可结合抗原的抗体分子。最初有比利时科学家Hamers.R在骆驼血液中发现，普通的抗体蛋白由两条重链和两条轻链组成，而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链，没有轻链，这些新型抗体能像正常抗体一样于抗原紧密结合，但不像单链抗体那样相互粘连聚集成块。与传统抗体相比，纳米抗体具有相对分子质量小、亲和力高、稳定性高、溶解性好、免疫原性低、穿透力强、人源化简单等优势。因此，应用纳米抗体技术监测血液中sPD-1的变化过程具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的主要目的是：提供一种抗PD-1的纳米抗体，能特异性识别PD-1。同时，还提供该抗体的应用。

本发明解决其技术问题的技术方案如下：

一种抗PD-1的羊驼单重链纳米抗体，所述抗体至少具有以下技术特征之一：

i、所述重链包括重链CDR1，即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列中的第26—35位氨基酸残基，或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列中的第26—35位氨基酸残基；

ii、所述重链包括重链CDR2，即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列中的第51—60位氨基酸残基，或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列中的第51—58位氨基酸残基；

iii、所述重链包括重链CDR3，即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列中的第99—117位氨基酸残基，SEQ ID NO:4所示氨基酸序列中的第97—116位氨基酸残基。

优选地，所述抗PD-1的羊驼单重链纳米抗体包括重链CDR1、重链CDR2以及重链CDR3；重链CDR1即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列中的第26—35位氨基酸残基，或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列中的第26—35位氨基酸残基；重链CDR2即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列中的第51—60位氨基酸残基，或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列中的第51—58位氨基酸残基；重链CDR3即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列中的第99—117位氨基酸残基，SEQ ID NO:4所示氨基酸序列中的第97—116位氨基酸残基。

优选地，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。

本发明还提供：

编码前文所述抗PD-1的纳米抗体的核酸。

优选地，所述核酸的序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供：

具有前文所述的核酸的原核表达载体和哺乳系统表达载体。