[发明专利]一种DUF642蛋白单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了一种DUF642蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明的DUF642的单克隆抗体，对DUF642蛋白具有高亲和力和高特异性，能广泛地用于DUF642检测上，特别可用于检测市售各品种葡萄中DUF642蛋白的表达情况。此外，本发明的单克隆抗体提供了一个靶向蛋白研究的工具，使得对不同败育品种葡萄中DUF642蛋白的表达与最终葡萄有无核的形成之间的调控关系能够有效地研究。

技术领域

本发明涉及杂交瘤细胞系及其产生的单克隆抗体与应用，特别是涉及针对细胞壁合成相关蛋白DUF642单克隆抗体和分泌该抗体的杂交瘤细胞系以及该抗体的应用。

背景技术

细胞壁DUF642蛋白家族，是植物中高度保守的可能与果胶结构修饰相关的蛋白。DUF642蛋白家族能够参与植物细胞壁理化上的修饰、发育或环境信号的响应。其在植物生长发育中发挥作用同时又在植物逆境时响应胁迫,例如干旱、盐、酸铝下起着重要作用。

根据之前的研究发现，在葡萄种子发育过程中，DUF642基因的表达与最终是否形成可繁育的种子之间具有明确的调控关系，即DUF642基因的表达与否，决定了葡萄的败育现象。目前市场中，大量出售的葡萄品种中，一部分是自然选育出来的天然败育品种，一部分是经过人工诱导的无核品种。

目前市面上并没有专门针对葡萄DUF642基因的抗体，因此在蛋白检测层面上，对于该研究领域缺乏有效的抗体工具，用于葡萄败育的基础研究，以及市售无核品种的葡萄在蛋白层面的检测。

发明内容

本发明的目的是提供能与DUF642蛋白专一结合的单克隆抗体，以解决现有技术存在的上述缺陷，本发明通过提供一个靶向蛋白研究的工具，使得对市售的不同品种葡萄中的DUF642蛋白的表达变化及蛋白网络图谱可以实现更深层次研究。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

本发明通过合成表达DUF642的全长重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，以其作为免疫原，免疫小鼠得到淋巴细胞，并利用杂交瘤细胞融合技术制得融合细胞，经免疫印迹法、有限稀释法和ELISA法，得到能够产出高亲和性和高特异性的单克隆抗体的细胞株，及由该细胞株分泌的单克隆抗体，并经免疫酶联，蛋白印记，免疫共沉淀加质谱和抗体芯片检测等验证，确定最有效抗体。

本发明获得的单克隆抗体具有如下结构：所述DUF642单克隆抗体的重链可变区的CDR1氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，重链可变区的CDR2氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，重链可变区的CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO:4 所示；轻链可变区的CDR1氨基酸序列如SEQID NO:5所示，轻链可变区的 CDR2氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，轻链可变区的CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

本发明还提供了所述单克隆抗体在制备检测DUF642蛋白的试剂盒中的应用。

优选地，所述试剂盒为检测DUF642蛋白的ELISA试剂盒，所述试剂盒是所述单克隆抗体作为包被抗体。

本发明还提供一种葡萄败育相关蛋白，所述蛋白由DUF642基因表达。本发明通过大量实验研究发现，DUF642蛋白的表达水平在葡萄的无核品种与有核品种中有显著差异，且，在经过败育处理的有核品种葡萄中，DUF642蛋白的表达水平显著提高。因此，表明该蛋白的表达与败育品种具有密切联系，可通过调节该蛋白的表达水平实现葡萄有无核形成之间的调控。

本发明还提供了所述的DUF642蛋白的单克隆抗体在制备检测葡萄有无核形成的试剂盒中的应用。由于DUF642蛋白能作为区别葡萄的无核品种与有核品种，因此，本发明的单克隆抗体也能用于检测无核品种与有核品种中的 DUF642蛋白。

本发明还提供了所述的DUF642蛋白的单克隆抗体在制备检测葡萄败育的试剂盒中的应用。由于DUF642蛋白的表达与败育现象具有密切联系，因此，本发明的单克隆抗体也能用于检测葡萄是否出现败育现象。