[发明专利]一种高产叶酸的乳酸菌、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种高产叶酸的乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌为长双歧杆菌BL21，其保藏号为CGMCC No.10452。

2.权利要求1所述的一种高产叶酸的乳酸菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.筛选：从自然界和婴幼儿的唾液及粪便中获取待筛选样品，将待筛选样品放入装有的生理盐水的瓶中，震荡混匀，所得产物记为菌液，所述生理盐水的质量为待筛选样品质量的15-20倍；

S2.稀释：将步骤1得到的菌液倒入装有生理盐水的试管进行10倍梯度逐步稀释，所得产物记为稀释菌液；

S3.涂布：将100μL步骤2得到的稀释菌液用涂布棒涂布于琼脂固体平板上，倒置放入培养箱中厌氧培养36-60h；

S4.纯化：培养结束后，挑取琼脂固体平板上单菌落个数大于50的琼脂固体平板，对在琼脂固体平板上的单菌落多次划线纯化，直至整个平板上菌落镜检形态一致。

3.根据权利要求2所述的一种高产叶酸的乳酸菌的制备方法，其特征在于，步骤3中所述的琼脂固体平板由以下步骤制得：将葡萄糖20g、蛋白陈l0 g、牛肉浸膏10g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸氢二铵2g、乙酸钠5g、吐温80 1g、硫酸镁0.59g、一水硫酸锰0.19g、L-半胱氨酸1g、蒸馏水1000mL和15g琼脂混合均匀，并用氢氧化钠调pH 6.8，于121℃灭菌15min。

4.根据权利要求2所述的一种高产叶酸的乳酸菌的制备方法，其特征在于，步骤3中所述的琼脂液体培养基由以下步骤制得：将葡萄糖20g、蛋白陈l0 g、牛肉浸膏10g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸氢二铵2g、乙酸钠5g、吐温80 1g、硫酸镁0.59g、一水硫酸锰0.19g、L-半胱氨酸1g、蒸馏水1000mL和15g琼脂混合均匀，氢氧化钠调pH 6.8，121℃灭菌15min。

5.根据权利要求2所述的一种高产叶酸的乳酸菌的制备方法，其特征在于，在步骤4纯化完成后，挑取步骤4得到的单菌落至琼脂液体培养基中扩培，并将菌株在含有30％甘油的琼脂液体培养基中保种，置于-80℃的冰箱中冷冻保存。

6.根据权利要求1所述高产叶酸的乳酸菌的在叶酸生产中的应用，其特征在于，采用所述乳酸菌合成叶酸。