[发明专利]一种用于多细胞种属鉴别和交叉污染检测的混合引物及其使用方法

权利要求书

1.一种用于多细胞种属鉴别和交叉污染检测的混合引物，其特征在于，包括以下引物对：

(1)对牛MDBK细胞的Cytb基因进行特异性扩增的引物对Ⅰ：

正向引物：5’-AGCCCTAGTAGCAGACCTATTG-3’

反向引物：5’-TTTGTTTTCGATTGTGCCGGCC-3’；

(2)对小鼠BALB/c-3T3细胞的Cytb基因进行特异性扩增的引物对Ⅱ：

正向引物：5’-ACATACGAAAAACACACCCAT-3’

反向引物：5’-TACTGATGAAAAGGCTGTTATT-3’；

(3)对狗MDCK细胞的Cytb基因进行特异性扩增的引物对Ⅲ：

正向引物：5’-ATCCTTACTAGGAGTATGCTTG-3’

反向引物：5’-CAGGTGAAAATAAAACTAGTGA-3’；

(4)对大鼠Walker-256细胞的Cytb基因进行特异性扩增的引物对Ⅳ：

正向引物：5’-ATCAATCCTAATCTTAGCCTTC-3’

反向引物：5’-GCTACTAGGATTCAGTAAAGGA-3’；

(5)对叙利亚仓鼠BHK-21细胞的Cytb基因进行扩增的引物对Ⅴ：

正向引物：5’-AGTTATAGCTACAGCATTCGTA-3’

反向引物：5’-GTTATGAGGGCAATCAATAGTAG-3’；

(6)对非洲绿猴Vero细胞的Cytb基因进行特异性扩增的引物对Ⅵ：

正向引物：5’-TGAATCTGAGGTGGGTACTCCATTGG-3’

反向引物：5’-GGTTGTAATTAGGAATCAGAACAGG-3’；

(7)对中国仓鼠CH0-K1细胞的CO I基因进行特异性扩增的引物对Ⅶ：

正向引物：5’-TTGGGAATTGATTAGTGCCTT-3’

反向引物：5’-TGGTGTTTGGTATTGTGTAACA-3’；

(8)对猫PG-4细胞的COI基因进行特异性扩增的引物对Ⅷ：

正向引物：5’-TCTCAGGATATACCCTTGACAAC-3’

反向引物：5’-GATGCGAAAGCTTCTCACACT-3’；

(9)对人Hela细胞的Cytb基因进行特异性扩增的引物对Ⅸ：

正向引物：5’-ACGGGATCAAACAACCCCCTA-3’

反向引物：5’-TCCGATTCAGGTTAGAATGAGG-3’；

(10)对猪PK-15细胞的COI基因进行特异性扩增的引物对Ⅹ：

正向引物：5’-ACCGTAGGAATAGACGTAGATACC-3’

反向引物：5’-ATGCTGTGTATGCGTCAGGATAA-3’；

(11)对恒河猴FRhK-4细胞的Cytb基因进行特异性扩增的引物对Ⅺ：

正向引物：5’-CCCTTACCTGAATTGGAAGCG-3’

反向引物：5’-TTGTTTTCGATTAGGGAGGCC-3’。

2.如权利要求1所述的用于多细胞种属鉴别和交叉污染检测的混合引物，其特征在于，所述混合引物中所述引物对Ⅰ、所述引物对Ⅱ、所述引物对Ⅲ、所述引物对Ⅳ、所述引物对Ⅴ、所述引物对Ⅵ、所述引物对Ⅶ、所述引物对Ⅷ、所述引物对Ⅸ、所述引物对Ⅹ和所述引物对Ⅺ等比例混合。

3.一种多细胞种属鉴别和交叉污染检测的方法，包括以下步骤：

(1)制备待测细胞样品；

(2)提取待测细胞的基因组DNA；

(3)以待测细胞的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的混合引物进行PCR扩增；

(4)PCR反应结束后，对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据扩增产物的DNA片段大小判定样品的来源细胞。

4.如权利要求3所述的多细胞种属鉴别和交叉污染检测的方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR扩增的反应体系为：10xPCR缓冲液2.5μL ，DNA聚合酶0.5μL ，DNA模板1μL ，dNTPMix 0.5μL ，混合引物13μL ，去离子水7.5μL 。