[发明专利]一种针对粪便乳糖的检测方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种针对粪便乳糖的检测方法，包括以下步骤：配制样本处理液、第一试剂组合物和第二试剂组合物，其中第一试剂组合物包括葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和指示剂，第二试剂组合物除含有第一试剂组合物各成分外，还含有乳糖酶，接着对样本预处理得到样本清液，取等量样本清液两份，分别与第一试剂组合物和第二试剂组合物混合反应，观察并比较两组反应体系的颜色深浅，判断样本中是否含有乳糖。本发明还公开一种基于上述方法的试剂盒。本发明的有益效果：创造性地通过测定原始存在于样本中的葡萄糖，对由乳糖分解生成的葡萄糖检测结果进行修正，排除干扰，准确性高，检测方法简单易于操作，对实验条件和试验者技能要求低。

技术领域

本发明属于生物样本体外检测领域，具体涉及一种针对粪便乳糖的检测方法和试剂盒。

背景技术

乳糖是一种二糖，主要来源于哺乳动物的乳汁中。正常人摄入含有乳糖的奶制品后，乳糖在小肠中被乳糖酶分解为一份子葡萄糖和一分子半乳糖，可直接被肠道细胞吸收，被身体利用和分解。乳糖不耐受(lactose intolerance,LI)是指因乳糖酶的相对或绝对缺乏而导致的以腹泻为主的相关消化道症状的现象。主要原因在于小肠中乳糖酶分泌量少或活性不足，导致摄入的乳糖不能被完全消化和分解，部分乳糖被肠道菌群酵解生成乳酸、甲烷、二氧化碳等，这些酵解产物刺激肠道使其功能紊乱。由于遗传多态性，不同种族人群发病率不同，中国人是LI的高发人群，LI在中国婴幼儿中发病率极高，可达46.9％-70.0％。由于婴幼儿以乳制品为主要食物，婴幼儿LI若不引起重视，可导致慢性腹泻、营养不良、贫血、骨质疏松等长期危害。

目前诊断LI的方法有几种，包括空肠活检测定乳糖酶的活性并病理组织学观察、呼气试验、乳糖耐量实验和粪便还原糖测定。空肠活检虽然准确，但为有创检测方法且对检测人员技能要求较高。呼气试验和乳糖耐量实验检测周期长，对患者依从度要求较高。粪便还原糖测定法则易受其他糖类影响，并且检测试剂含有重金属。专利文献CN109557088A、CN106645132A分别公开了一种检测粪便乳糖含量的试纸/试剂卡，其通过检测乳糖分解生成的半乳糖来判断粪便样本中的乳糖含量，具有特异性效果，然而其检测需要加热以加快反应，并且原料试剂半乳糖酶价格较高。专利文献CN 108070635 A公开了一种粪便乳糖检测试剂盒，其通过检测乳糖分解后的葡萄糖来半定量测定粪便中乳糖含量，然而其忽略了粪便中原始存在的葡萄糖的影响，易出现假阳性结果。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种针对粪便乳糖的检测方法。其技术方案如下：

一种针对粪便乳糖的检测方法，其关键在于包括以下步骤：

步骤一、配制试剂：样本处理液、第一试剂组合物和第二试剂组合物；

所述第一试剂组合物包括葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和指示剂；

所述第二试剂组合物包括乳糖酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和指示剂；

步骤二、样本预处理：取新鲜粪便样本加入到样本处理液中分散混匀，固液分离后取样本清液；

步骤三、显色反应：取等量样本清液两份，分别与所述第一试剂组合物和第二试剂组合物混合反应，形成第一反应体系和第二反应体系；

步骤四、颜色对比：观察并比较所述第一反应体系和所述第二反应体系的颜色深浅，进行如下判断：

若所述第一反应体系和所述第二反应体系均显色，且二者颜色相对深浅无法区分，则认为样本中不含乳糖；

若仅所述第二反应体系显色，或所述第一反应体系和所述第二反应体系均显色，且第一反应体系的颜色较所述第二反应体系的颜色浅，则认为样本中含有乳糖；

若所述第一反应体系和所述第二反应体系均不显色，则认为样本中不含有葡萄糖和乳糖；

出现其他颜色现象时，重复所述步骤二到步骤四进行复检，或稀释所述样本清液后进行复检。