[发明专利]一种CCR2基因人源化的非人动物及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种CCR2基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述的非人动物体内表达人CCR2蛋白，所述的非人动物的基因组中包含人CCR2基因的部分核苷酸序列，所述的构建方法包括使用靶向载体将人CCR2基因的部分核苷酸序列替换至非人动物CCR2基因座，所述靶向载体包含供体DNA序列，所述的供体DNA序列包含人CCR2基因的部分核苷酸序列，所述的人CCR2基因的部分核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示，所述的靶向载体还包含5’同源臂和3’同源臂；

所述5’同源臂序列如SEQ ID NO：7所示，所述3’同源臂序列如SEQ ID NO：8所示；

或者，

所述5’同源臂序列如SEQ ID NO：36所示，所述3’同源臂序列如SEQ ID NO：37所示。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的非人动物的基因组中包含人源化CCR2基因，所述的人源化CCR2基因转录的mRNA序列为SEQ ID NO：38所示核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述的非人动物为非人哺乳动物。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的非人哺乳动物为啮齿类动物。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述的啮齿类动物为小鼠或大鼠。

6.一种靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体包含供体DNA序列，所述的供体DNA序列包含人CCR2基因的部分核苷酸序列，所述的人CCR2基因的部分核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示，所述的靶向载体还包含5’同源臂和3’同源臂；

所述5’同源臂序列如SEQ ID NO：7，所述3’同源臂序列如SEQ ID NO：8所示；

或者，

所述5’同源臂序列如SEQ ID NO：36所示，所述3’同源臂序列如SEQ ID NO：37所示。

7.一种多基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

i）采用权利要求1-5任一所述的构建方法获得的非人动物；

ii）将步骤i）获得的非人动物与其他基因修饰的非人动物交配、体外授精或直接进行基因编辑，并进行筛选，得到多基因修饰的非人动物，所述的其他基因修饰的非人动物包括基因CTLA-4、PD-1人源化的非人动物。

8.来源于权利要求1-5任一所述的构建方法构建的非人动物、权利要求7所述的构建方法制备的多基因修饰的非人动物的应用，其特征在于，所述的应用包括在需要涉及人类细胞的免疫过程的产品开发，制造人类抗体，或者作为药理学、免疫学、微生物学和医学研究的模型系统中的应用；或在生产和利用动物实验疾病模型，用于病原学研究和/或用于开发诊断策略和/或治疗策略中的应用；或者在筛选、验证、评价或研究CCR2功能、人CCR2信号机理、靶向人的抗体、靶向人的药物，免疫相关疾病药物以及抗肿瘤或抗炎症药物中的应用，所述的应用为非疾病的诊断和治疗目的。