[发明专利]一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法

说明书

本发明涉及一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法，荞麦碱提取物含53.6％芦丁和37.2％槲皮素。实验过程如下，S1、本实验选取分娩后3至7天的ICR小鼠作为实验对象，将小鼠分为三组，空白对照组(NT)，乳腺炎模型组(LPS)，给药治疗组(LPS+TBF)，每组3只小鼠。S2、用戊巴比妥钠将小鼠进行麻醉保定，对乳腺炎模型组和给药治疗组小鼠的第四对乳区注射LPS进行乳腺炎的模型构建，24h后采取样品。此荞麦碱提取物用于治疗乳腺炎的实验方法，通过HE染色技术评估腺组织的损伤情况，并检测乳腺组织内髓过氧化物酶(MPO)活性的高低。实验结果可证明荞麦碱提取物对于乳腺炎具有治疗的作用。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体为一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法。

背景技术

奶牛乳房炎为乳房实质、间质的炎症。病因多由机械性刺激、病原微生物侵入及化学物理性损伤所致。其主要症状有乳房的红、肿、热、痛等炎症表现。同时伴有泌乳减少或停止，乳汁成分发生改变以及牛奶产量的减少等症状，每年奶牛乳腺炎的防治给畜牧业养殖造成巨大的经济损失。

在引起乳腺炎的众多致病因素病因中，病原微生物的侵入是主要病因，目前发现约有150种病原体可引起奶牛乳腺炎，其中大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌是最常见的致病细菌，针对奶牛乳腺炎的治疗，抗生素是目前最普遍广泛的治疗方法，但随着抗生素的大量使用、滥用，耐药菌株也越来越多，抗生素的疗效降低，不能从根本上解决奶牛乳腺炎，并且使用抗生素存在药物残留等问题。

近年来中药成分治疗奶牛乳腺炎逐渐被人们所重视，其具有来源广、易获取、不会引起抗生素残留、不易引起细菌耐药等优点。荞麦碱提取物含有53.6％芦丁和37.2％槲皮素，其具有镇痛抗炎，降血糖、血脂,抗氧化等广泛的药理活性。但目前还没有关于荞麦碱提取物对奶牛乳腺炎治疗的报道。

发明内容

(一)解决的技术问题

根据目前关于治疗乳腺炎的不足之处，本发明提供了一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法，本发明具备药物提取材料无害且来源广泛、治疗乳腺炎的效果明显，有利于解决奶牛乳腺炎治疗过程中抗生素残留、耐药细菌的产生以及备选治疗药物不足等问题。

(二)技术方案

为达到上述要求，本专利提供以下实验步骤：一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法，荞麦碱提取物含有53.6％芦丁和37.2％槲皮素，具体操作如下：

S1、本实验选择8周龄的ICR小鼠进行合笼，每笼1公2母，选取分娩后3至7天的ICR小鼠作为实验对象。实验分为3组，分别是空白对照组(NT)、乳腺炎模型组(LPS)、药物治疗组(LPS+TBF)，每组3只小鼠。

S2、小鼠进行腹腔注射荞麦碱提取物给药1次，给药浓度为10mg/kg，每只小鼠注射0.4mL，给药时间为注射LPS前1h。

S3、在注射LPS后24h进行乳腺的取样，一部分乳腺组织用于石蜡切片的制作，观察乳腺组织的病理损伤情况。

S4、取一部分乳腺组织用于MPO活性测定，通过MPO活性的高低可以反应白细胞如中性粒细胞在组织内的浸润情况，用来评估乳腺组织内炎症反应的严重程度。

优选的：小鼠乳腺炎模型构造方法为:按45mg/kg的比例配制戊巴比妥钠溶液进行小鼠的麻醉，并将其仰面保定，将第四对乳区周围进行消毒，剪掉约1mm乳头，两侧乳头均注射50μL浓度为0.2mg/mL的LPS，LPS注射后24h采取样品并放在-80℃箱保存。

优选的：石蜡组织切片步骤:取出新鲜的乳腺组织，将其用PBS涮洗后，放进提前用PBS配置好浓度为4％的甲醛溶液中固定24h，经过不同浓度的酒精梯度脱水、放入二甲苯中透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色等步骤获取HE染色结果。最后评估乳腺组织的病理损伤情况。