[发明专利]一种表面包被矿化细胞外基质的PEEK多孔微球、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种表面包被矿化细胞外基质的PEEK多孔微球的制备方法，包括以下步骤：

A)在保护气的条件下，将PEEK微球置于处理液中加热搅拌，干燥后，得到表面多孔化的PEEK微球；

所述处理液包括二甲基亚砜和硼氢化钠；

B)将所述表面多孔化的PEEK微球进行灭菌，然后浸泡于DMEM培养基中12～24h后，得到浸泡后的PEEK多孔微球；

C)将传至第3代的MC3T3-E1细胞与所述浸泡后的PEEK多孔微球在DMEM培养基中混匀，进行培养，22～26h后更换DMEM培养基继续培养，22～26h后将DMEM培养基更换为矿化培养基进行培养，22～26h后换液，之后，每隔46～50h进行一次换液，更换为矿化培养基的第7～9d经脱细胞处理，得到表面包被矿化细胞外基质的PEEK多孔微球；

所述矿化培养基包括DMEM培养基、CaCl₂、K₂HPO₄和聚天门冬氨酸。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PEEK微球按照以下方法制备得到：

将聚醚醚酮粉末与浓硫酸混合，得到混合溶液；

将所述混合溶液采用气流法制备得到微球体；

将所述微球体与水进行水热反应，得到PEEK微球。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述保护气为氮气；

所述二甲基亚砜和硼氢化钠的用量比为60～80mL：130～150mg；

所述处理液按照以下方法进行制备：

将二甲基亚砜和硼氢化钠混合后，加热至115～125℃，得到处理液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述加热搅拌的温度为115～125℃，时间为5～7h，加热搅拌的转速为200～400rpm。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述加热搅拌后，还包括洗涤；

所述洗涤包括：

将加热搅拌后的PEEK微球依次浸没于甲醇中15～30min、一次水10～20min、0.4～0.6mol/L的盐酸溶液10～20min、一次水10～20min，体积浓度为95％～100％的乙醇10～20min。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤B)中，所述灭菌包括：

将所述表面多孔化的PEEK微球采用体积浓度为75％的乙醇灭菌，用PBS缓冲液清洗后，再在115～120℃下蒸汽灭菌25～35min。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤C)中，将传至第3代的MC3T3-E1细胞与所述浸泡后的PEEK多孔微球在DMEM培养基中混匀前，还包括：

将传至第3代的MC3T3-E1细胞以2×10⁴每孔的密度种植于细胞培养板中；

将传至第3代的MC3T3-E1细胞与所述浸泡后的PEEK多孔微球在DMEM培养基中混匀的时间为1～2min。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤C)中，所述脱细胞处理包括以下步骤：

a)将经过矿化培养基培养的PEEK微球用PBS缓冲液清洗1～3遍，然后转移到脱细胞液中，室温下置于转速为60～100rpm的摇床10min；

所述脱细胞液包括NH₄OH和Triton X-100；所述脱细胞液中，NH₄OH的浓度为20mmol/L，Triton X-100的浓度为0.25wt％；

b)将步骤a)得到的PEEK微球用PBS缓冲液清洗后，进行冷冻干燥。