[发明专利]一种天然抗氧化活性物质的提取与检测方法

说明书

本发明属于本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种天然抗氧化活性物质的提取与检测方法。该包括如下步骤：步骤一、抗氧化活性成分提取采用恒温振荡‑超声有机溶剂提取联合固相萃取；步骤二、将步骤一得到的样品提取液采用HPLC进行检测，检测条件如下：色谱柱为Dikma ODS Csubgt;18/subgt;色谱柱；柱温30‑40℃；流动相A/B：流动相A为0.02％‑0.05％乙酸铵，其中流动相A中含有0.1％‑0.2％抗氧剂，流动相B为乙腈；洗脱方式为梯度洗脱。本发明提供的方法对18种抗氧化活性成分在0.5μg/mL‑50.0μg/mL质量浓度范围内呈现良好线性关系，Rsupgt;2/supgt;≥0.9996；具有优异的可靠性和精确度。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种天然抗氧化活性物质的提取与检测方法。

背景技术

天然抗氧化活性物质能够有效清除人体自由基、延缓衰老。有关自由基生命科学的大量研究证实：自由基作用影响人类生理性衰老和某些病理过程，自由基脂质过氧化作用与自由基清除剂活性同机体衰老程度密切相关。要降低自由基对人体的危害，除了依靠体内自由基清除系统外，还要寻找和发掘外源性自由基清除剂，利用清除剂与自由基结合，以阻断外界自由基攻击，保护人体免受伤害。通过合理服用抗氧化剂，可有效预防人体因氧化失衡而引起的各种疾病如癌症、心脏病、过早衰老和老年痴呆症等。

植物类食品和中药材中广泛存在丰富的天然抗氧化成分，食品中常见天然抗氧化成分主要为胡萝卜素、类胡萝卜素和多酚等，如β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、玉米黄素、虾青素等；中药材抗氧化成分主要为多酚，包括黄酮(如木犀草素、芹菜素)、黄烷酮(二氢黄酮，如橙皮素、柚皮素)、黄酮醇(如槲皮素、山奈酚、杨梅素)等。从自然界中寻找安全、高效、廉价、低毒的天然抗氧化剂是目前中药食品领域抗氧化产业的发展趋势。研究植物类天然抗氧化活性成分有效提取与含量检测，为发现可能含有抗氧化成分的物质并合理选择研制天然抗氧化剂及其配方提供了科学思路，对新型功能性抗氧化剂的利用和开发具有重要意义，对人类健康和延缓衰老提供新的线索和希望。

但是由于天然抗氧化活性成分易受环境介质影响，尤其是多数类胡萝卜素在光、氧、热等因素下不稳定，给样品前处理和上机分析测定造成困难。且大多数有关HPLC等仪器测定方法仅仅用于分析单一或少数几种抗氧化活性成分，而针对食品和中药材中抗氧化活性成分的多组分测定的相关文献和专利报道，尤其是针对植物中的类胡萝卜素、多酚类、黄酮类、异黄酮类等天然抗氧化活性成分的快速高效提取、批量精准筛选和同时在线检测方法则鲜有报道。因此，亟需开发适用于食品和中药材的高效快速前处理方法和高通量多组分同时在线测定技术。

在提取方法上，目前常见的有溶剂提取法(Solvent extraction,SE)，超声波提取法(Ultrasonic extraction,UE)，微波提取法(Microwave extraction,MAE)，超临界流体提取法(Supercritical fluid extraction,SFE)，加速溶剂提取法(Accelerated solventextraction,ASE)等等。但MAE法多适于多糖类、皂苷类和生物碱类的提取，SFE和ASE自动化程度高、对仪器设备要求高、温度压力条件苛刻；SE和UE凭借其设备简单、操作简便、适用性广、分离性强等特点而较常在实验室中使用。在仪器检测上，目前常见的是紫外可见分光光度法(Ultraviolet-visible spectrophotometry,UV-Vis)，气相色谱法(Gaschromatography,GC)，高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)等仪器检测技术，但是UV-Vis一般测定某一成分的顺反异构体总含量，无法实现分离检测，GC不能用于热不稳定成分分析，只能分析挥发性抗氧化物质；HPLC则可以实现对几乎所有物质的不同同系物或者同一类物质不同同分异构体的有效分离测定，很大程度上优于UV-Vis和GC等检测方法。

发明内容