[发明专利]一种人iPSC来源的锥体神经细胞前体细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种人iPSC来源的锥体神经细胞前体细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)将人iPSC接种于matrigel基质胶上，并用iPSC专用培养基中预培养2d后，获得预培养细胞；

2)将所述预培养细胞置于第一诱导分化培养基中进行第一诱导分化培养获得第一分化细胞；

3)将所述第一分化细胞置于第二诱导分化培养基中进行第二诱导分化培养获得第二分化细胞；

4)将所述第二分化细胞置于第三诱导分化培养基中进行第三诱导分化培养获得锥体神经细胞前体细胞；

所述第一诱导分化培养基为DDM培养基+终浓度0.2～2μmol/L的Dorsomorphin+20mL/L的B27；

所述第一诱导分化培养的时间为14～18d；

所述第二诱导分化培养基为DDM培养基+20mL/L的B27；

所述第二诱导分化培养的时间为7～9d；

所述第三诱导分化培养基为DDM培养基+终浓度5～15mmol/L的ROCK inhibitor+20mL/L的B27；

所述第三诱导分化培养的时间为6～8d。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一诱导分化培养基中Dorsomorphin的终浓度为0.8～1.2μmol/L。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述第一诱导分化培养过程中，每2～4d更换一次第一诱导分化培养基。

4.权利要求1～3任意一项所述的制备方法制备获得的锥体神经细胞前体细胞。

5.权利要求4所述的锥体神经细胞前体细胞在制备治疗脊髓损伤的药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物中的锥体神经细胞前体细胞的浓度为1×10³～1×10⁶个/μL；所述药物中还包括细胞重悬液。

7.权利要求4所述的锥体神经细胞前体细胞在制备促进产生神经营养因子的药物中的应用。

8.权利要求4所述的锥体神经细胞前体细胞在制备调节小胶质细胞M1和M2亚型平衡的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述锥体神经细胞前体细胞抑制M1亚型小胶质细胞在脊髓损伤部位的增殖。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述锥体神经细胞前体细胞促进M2亚型小胶质细胞在脊髓损伤部位的增殖。