[发明专利]肝素结合蛋白测定试剂盒

说明书

本发明公开了一种肝素结合蛋白测定试剂盒，其包括第一试剂、第二试剂和试纸条。本发明肝素结合蛋白测定试剂盒可通过定量客观反映HBP的存在，为临床诊断及疗效观察和预后判断提供了更有力的实验诊断依据。本发明所提供的肝素结合蛋白测定试剂盒特异性高，重复性好，检测灵敏度高，线性范围宽，稳定性高。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及肝素结合蛋白测定试剂盒，特别是涉及一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒及其应用。

背景技术

肝素结合蛋白(heparin-bindingprotein,HBP)也被称为azurocidin或者CAP37，是中性粒细胞来源的颗粒蛋白，HBP的趋化活性、杀菌能力以及肝素结合能力都与其自身带有较强的正电荷有关，HBP作为一种趋化物质，可以激活单核细胞和巨噬细胞，诱发血管渗漏和组织水肿，体外能诱导Ca2+依赖的细胞骨架重排以及单层内皮细胞间隙的形成。HBP能增加血管内皮细胞通透性是因为HBP带有较强的正电荷，与内皮细胞接触导致内皮细胞胞内Ca2+快速激活，形成肌动蛋白张力纤维，从而导致细胞旁通路渗漏。HBP的浓度过高会导致严重的血管渗漏，从而引起低血压甚至休克，除此之外，HBP还与软组织感染等多种感染有关，这表明HBP与严重的细菌感染有紧密的关系，极有可能成为临床诊断指标和药物治疗靶标。

目前，临床上将HBP≥15ng/mL作为严重败血症的指标。HBP具有出现早、灵敏度高、特异性强、阳性/阴性检出率高等优点。HBP只在急性细菌感染时浓度升高，在病毒感染和非特异性炎症时保持较低水平。传统炎症指标，如降钙素原、C反应蛋白、中性粒细胞、白细胞、乳酸等的影响因素较多，尤其是老年人常伴有免疫功能反应低下，这些传统炎症指标的升高水平不一定能精确反映病情的严重程度。

检测肝素结合蛋白(HBP)的代表产品是英国Axis-Shield公司的酶联免疫分析试剂盒(国械注进20162400300)。酶联免疫分析法是在96孔板上包覆捕捉抗体，当含有抗原的样品在孔中培养时，包覆在孔内的抗体通过抗体抗原反应捕捉样品中的抗原，然后用酶标记的检测抗体与抗原结合，形成抗体-抗原-抗体的三明治结构。标记好的的酶可以与相应的底物定量地发生反应，产生颜色变化。通过测量特定波长下的吸光度变化，可以定量检出样品中的抗原浓度。酶联免疫分析法可以准确地检测样品中的肝素结合蛋白浓度，但是实际操作中酶联免疫分析(ELISA)实验耗时比较长，一般需要4至5小时才能得到检测结果，作为预测脓毒症及炎症反应的重要指标，不能够很好地满足门诊或者急诊的快速检测的需求。同时96孔板只能是每8孔进行拆卸，不能够做到单人份测试，且检测范围只能覆盖5.9-200.0ng/mL，由于临床上报道的HBP值高于检测范围上限的例子较多，该试剂盒的使用上存在局限性。其他报道的检测方法还有CN204882574U公开的胶体金法和CN204882575U公开的免疫荧光层析的方法。胶体金法和免疫荧光层析法虽然可以快速检测，但是只能进行定性或者半定量的检测，准确度低，无法提供精确的临床判断依据。同时受限于方法本身，由于使用的是非均相反应体系，检测的精密度差，且无法从操作程序上清除干扰物，使得测试的准确性不能得到保障。

发明内容

基于上述背景技术，本发明所要解决的技术问题在于一种肝素结合蛋白测定试剂盒。为了实现本发明的发明目的，拟采用如下技术方案：

本发明一方面涉及肝素结合蛋白测定试剂盒，包括第一试剂、第二试剂和试纸条，其特征在于：

其中第一试剂为含有兔抗人肝素结合蛋白抗体和海藻酸钠的磷酸盐缓冲液；

所述第二试剂为含有异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗以及萘酚的磷酸盐缓冲液；

试纸条包括塑料垫板，塑料垫板上设置硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜分别设置检测线和质控线，检测线左侧硝酸纤维素膜上设置玻璃纤维素膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸，玻璃纤维素膜上设置滤血膜；所述检测线上包被来源于小鼠的肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体；所述质控线上包被羊抗鼠IgG多克隆抗。