[发明专利]一种人脐带来源Muse细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种人脐带来源Muse细胞的培养方法，包括确定参与人员、确定实验仪器及试剂、确定实验方法、进行Muse细胞的分离、Muse细胞的体外扩增培养。本发明的有益效果是：应用该培养体系，分离获得的MSCs呈典型的成纤维细胞形态，具有较强的增殖能力。CD29、CD44、CD90、CD105均呈阳性表达，而CD34、CD45呈阴性表达，该种培养方法可以获得较高纯度的Muse细胞，对今后Muse细胞在间充质干细胞治疗组织再生，免疫调节等临床应用提供一定参考。

技术领域

本发明涉及一种人脐带来源Muse细胞的培养方法，具体为一种人脐带来源Muse细胞的培养方法，属于细胞研究技术领域。

背景技术

多系分化持续应激细胞（multilineage differenti-ating stress enduring，Muse）是一种特殊的成体多潜能干细胞。2010年，Mari Dezawa等从BMSCs和皮肤纤维母细胞中分离出多系分化持续应激细胞Muse，该细胞特异性表达阶段特异性胚胎抗原-3(stagespecific embryonic antigen-3，SSEA3)和CDl05，能分化为3个胚层的细胞，是潜在的种子细胞的理想来源。Muse 细胞是间充质基质细胞（mesenchymal stromal cells，MSCs）的1个亚群，目前已经发现 Muse细胞存在于骨髓、脂肪、皮肤、脾脏、胰腺、脐带等间充质组织，常用的筛选来源是骨髓间充质和脂肪间充质组织，但 Muse细胞含量仅有0．01％～3％。关于Muse细胞的文献报道较少。所以，Muse细胞作为一种新发现的、初步被证实具有组织修复功能的理想种子细胞，有待于进一步深入研究。

目前已经发现 Muse细胞存在于骨髓、脂肪、皮肤、脾脏、胰腺、脐带等间充质组织，常用的筛选来源是骨髓间充质和脂肪间充质组织，但 Muse细胞含量较少，后期进行扩增培养的效率较低。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决问题而提供一种人脐带来源Muse细胞的培养方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：一种人脐带来源Muse细胞的培养方法，包括以下步骤：

包括以下步骤：

步骤一、确定参与人员。

步骤二、确定实验仪器及试剂。

步骤三、确定实验方法。

步骤四、进行Muse细胞的分离。

步骤五、Muse细胞的体外扩增培养。

作为本发明再进一步的方案：所述步骤二中，实验仪器包括：流式细胞仪、CO2培养箱、台式离心机、生物安全柜、显微镜、荧光显微镜及照相系统、酶标仪间充质干细胞无血清条件培养基。

作为本发明再进一步的方案：所述步骤三中，采用贴壁法进行Muse细胞的分离。

作为本发明再进一步的方案：所述步骤四中，进行进行Muse细胞的分离包括以下过程：

（1）、在超净台内将脐带用无菌生理盐水冲洗干净。

（2）、将洗净的脐带剪成小于1mm³的组织块碎后放入离心管中，将组织块平铺于10个T75培养瓶底部，加入含无血清培养基，置于37℃、含5%二氧化碳饱和湿度的恒温培养箱中。

（3）、6天后培养液全量换液一次，镜下观察是否有细胞从组织块周围爬出，以后每3天换液一次，直至可见细胞爬出且密度达70-80%,可以考虑进行传代操作。