[发明专利]一种非特异性过氧合酶的重组菌株及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 202110205876.X | 申请日： | 2021-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN112961791B | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 蓝东明;乜晓爽;王永华;马云建;王方华;杨博 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/62;C12N9/08;C12P5/00;C12P7/22;C12P11/00;C12R1/84 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 崔红丽 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 非特 异性 过氧 重组 菌株 及其 构建 方法 应用 | ||
1.重组非特异性过氧合酶的发酵制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
将非特异性过氧合酶重组菌株接种至BMGY液体培养基中，培养至菌体OD为0.8～1.0；按5～10％v/v接种量接种至BMMY液体培养基中，同时添加终浓度为5～85μM的氨基乙酰丙酸；振荡培养，每24h添加甲醇进行诱导；发酵结束后，离心取上清液，发酵上清液含有重组的非特异性过氧合酶；
所述的非特异性过氧合酶重组菌株，以pPICZαA质粒为出发载体，以毕赤酵母作为宿主菌，表达非特异性过氧合酶GmaUPO；所述非特异性过氧合酶GmaUPO的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示；
非特异性过氧合酶目的基因和原始信号肽SPGma片段融合成融合基因连接到pPICZαA质粒中，然后电转化到毕赤酵母中进行表达；
原始信号肽SPGma的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；
所述的毕赤酵母为毕赤酵母X-33。
2.根据权利要求1所述的发酵制备方法，其特征在于：
所述的培养至菌体OD为0.8～1.0的条件为于29±1℃，240～250rpm条件下培养至菌体OD为0.8～1.0；
所述的振荡培养的条件为于22～28℃，240～250rpm转速条件下培养96h；
氨基乙酰丙酸的终浓度为25～65μM；
甲醇的终浓度为1±0.1％v/v。
3.根据权利要求1所述的发酵制备方法，其特征在于：
非特异性过氧合酶目的基因和原始信号肽SPGma片段融合成融合基因连接到pPICZαA质粒的EcoRI和SalI位点之间，然后电转化到毕赤酵母中进行表达。
4.根据权利要求1所述的发酵制备方法，其特征在于：
所述非特异性过氧合酶GmaUPO的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
原始信号肽SPGma的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
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