[发明专利]一种猫体液样本处理试剂、检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种猫体液样本处理试剂、检测试剂盒及应用，涉及生物化学技术领域。本发明提供了一种猫体液样本处理试剂，其包括质量体积浓度为1‑20％的三氯乙酸和水。利用三氯乙酸可以与样本中的蛋白反应生成蛋白质盐不溶物，同时三氯乙酸又作为蛋白质变性剂可以促使蛋白质的构象发生改变，从而使得蛋白质暴露出较多的疏水性基团，有利于蛋白质聚集沉淀，从而提升样本中核酸的纯度。

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，具体而言，涉及一种猫体液样本处理试剂、检测试剂盒及应用。

背景技术

猫冠状病毒(Feline Covronavirus，FCoV)的感染在猫群中极为普遍，目前，猫冠状病毒有两种表现型：引起猫传染性腹膜炎的变异型(Feline Infectious Peritonitis，FIP)和普通猫冠状病毒。FCoV感染后一般引起较轻的胃肠道症状；FIP的临床表现主要分为渗出型和非渗出型两类，渗出型FIP以腹膜炎、大量腹水聚集为主要症状，非渗出型FIP以眼部以及神经症状为主，致死率非常高。临床上一般用猫胸腹水样本来检测猫冠状病毒(FCoV)的核酸，快速、准确地诊断FCoV，对该病的临床诊断及治疗有着重要的意义。

一般可使用磁珠法提取核酸及实时荧光定量PCR法检测猫粪便、直肠拭子、胸水、腹水等样本中的猫冠状病毒。

其中，磁珠法核酸提取是指利用可结合核酸分子的磁性微粒为载体，样品在与裂解液、磁性微粒混合后，核酸吸附在磁性微球表面。这种特定的吸附作用使DNA在外加磁场的作用下与样本中的其它组分分离。在简单的清洗和洗脱后，即可得到高纯度的核酸。

而实时荧光定量PCR是指在PCR扩增过程中，高温变性，核酸双链解离为单链；退火时，病毒的引物探针与靶核酸特异性地结合；在延伸阶段，模板-引物的结合物在聚合酶、dNTP等的作用下开始进行互补链的延伸，同时聚合酶的外切活性将探针上的荧光基团剪切下来，使其远离于探针另一端的淬灭基团，发出荧光。这样，荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。通过仪器监测荧光信号即可完成对PCR过程的实时监控。内参是指选用与靶核酸无关联的外源非竞争性内参质粒。在实验过程中，内参样品跟随待测样品同时进行核酸提取与扩增，最终内参结果为阳性，即可证明实验结果的有效性。

目前，用磁珠法提取蛋白总量较多的猫胸腹水样本核酸时存在以下缺点：直接将猫胸腹水样本用磁珠法核酸提取时容易发生磁珠聚集，洗涤过程中磁珠难以混匀，提取后的核酸纯度较差，不能满足荧光定量PCR对核酸纯度的要求。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猫体液样本处理试剂、检测试剂盒及应用以解决上述技术问题。

发明人发现，磁珠法核酸提取试剂盒里的蛋白酶K很难充分消化黏蛋白，裂解不充分，导致核酸的杂蛋白含量较高，从而抑制了实时荧光定量PCR。特提供了一种样本处理试剂。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种猫体液样本处理试剂，其包括质量体积(g/ml)浓度为1-20％的三氯乙酸溶液，样本为猫胸腹水。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述试剂包括质量体积浓度为1-10％的三氯乙酸溶液；

优选地，猫体液样本处理试剂包括质量体积浓度为1.5％的三氯乙酸溶液；

优选地，三氯乙酸溶液的溶剂为DEPC处理水。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述猫体液样本处理试剂还包括表面活性剂和螯合剂；

优选地，表面活性剂为SDS、Tween 20、Triton X-100、NP-40和十二烷基肌氨酸钠中的至少一种；

优选地，螯合剂为有机螯合剂或无机螯合剂；