[发明专利]一种超声处理脂肪提取物的制备方法、提取物及应用

说明书

本发明属于生物材料技术领域，公开了一种超声处理脂肪提取物的制备方法、提取物及应用，包括：将脂肪组织经过离心后取中间脂肪细胞层；将获取的中间脂肪细胞层进行超声破碎；对破碎细胞进行离心，获得透明液体层即为所述超声处理脂肪提取物。本发明的超声处理脂肪提取物可应用于制备促血管形成和/或新生药物、制备改善血管新生不足或低下的药物、制备调整机体或组织的血管新生及状态的药物。本发明在第一步离心完之后直接超声破碎细胞、二次离心，一步获取超声破碎细胞来源的脂肪提取物，全过程仅需不到30分钟。本发明不经过机械乳化及反复冻融，获取时间更短，所含细胞因子更为丰富，效果更佳。

技术领域

本发明属于生物材料技术领域，尤其涉及一种超声处理脂肪提取物的制备方法、提取物及应用。

背景技术

目前，纳米脂肪是将脂肪组织进行机械切割后乳糜化处理得到的产物，其中含有脂滴、基质细胞以及多种生长因子，在软组织填充中得到应用。以往的研究发现，纳米脂肪注射光老化裸鼠皮下，可以促进真皮再生和新生血管形成，纳米脂肪辅助颗粒脂肪移植，可以通过促血管新生提高脂肪的存活率。因纳米脂肪中含有基质细胞和生长因子，以往研究认为纳米脂肪中细胞成分起重要作用，在辅助颗粒脂肪移植研究中究竟细胞成分是否必需目前仍不明确。

CEFFE技术是一种新的脂肪提取物技术，其取自脂肪组织，系去除脂滴和细胞的液体，主要含有IGF-1、BDNF、GDNF、TGF-β、HGF、VEGF、bFGF、PDGF和EG F等细胞因子，以及含有微量NT-3、GH和GMCSF等细胞因子。其提取物可以作为活性成分在促进细胞的增殖、迁移、成管、组织移植、创面修复和治疗缺血性疾病等方面应用。

然而，现有的提取方法需要经过破碎、首次离心、乳化和二次离心的方法，收集中间层的透明液体而得，期间需要经过乳化及反复冻融破碎细胞，操作流程较多，消耗时间较长。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的脂肪提取物的提取方法操作流程较多，提取步骤繁琐，消耗时间较长，人工步骤过多，且提取的产物不佳。

解决以上问题及缺陷的难度为：操作流程上乳化和冻融两种方式均需要人工多步骤操作，无法将其简化为标准化仪器获取；时间上，通过乳化及冻融破碎细胞均需要较长时间操作，特别是冻融步骤，需要12小时甚至一天才能达到所需温度；如果在操作流程及时间上达不到要求，则提取产物质量不佳。

解决以上问题及缺陷的意义为：解决脂肪提取物操作流程较多、人工步骤过多、提取步骤较繁琐、消耗时间长等问题，将使得脂肪提取物的获得更简易，便于制定严格的行业标准，同时在手术即时便可获得脂肪提取物，而不需要等患者回家后第二次来院。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种超声处理脂肪提取物的制备方法、提取物及应用。

本发明是这样实现的，一种超声处理脂肪提取物的制备方法，所述超声处理脂肪提取物的制备方法包括：

步骤一，将脂肪组织经过1200g 3min 4℃离心后分为三层：上油层、中间脂肪细胞层、下液体层，取中间脂肪细胞层；

步骤二，将获取的中间脂肪细胞层进行超声破碎：根据单次超声破碎脂肪组织量不同，超声过程参数设定为功率200-700W(频率10-30kHz)，每超声2-5秒暂停相同时间，超声过程总时间5-10分钟；

步骤三，对破碎细胞进行1200g 5min 4℃二次离心后分为四层：上油层、中上脂肪层、中下透明液体层、下破碎细胞层，获得透明液体层即为所述超声处理的脂肪提取物。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述超声处理脂肪提取物的制备方法制备的超声处理脂肪提取物。

本发明的另一目的在于提供一种所述超声处理脂肪提取物在制备促血管形成和/或新生药物中的应用。