[发明专利]南美白对虾肝肠孢子虫疾病的防控方法

权利要求书

1.南美白对虾肝肠孢子虫疾病精准防控的整体解决技术方案，其特征在于步骤如下：

(1)病毒DNA/RNA提取；

(2)荧光定量快速检测；

(3)现代中药技术和微生态技术干预。

2.根据权利要求1所述南美白对虾肝肠孢子虫疾病精准防控的整体解决技术方案，其特征在于步骤(1)病毒DNA/RNA提取的具体操作如下：

(1)转移1mL溶解液至装有100PL或100mg样品的离心管中。充分涡旋以溶解混匀样品。

(2)10,000rpm离心3分钟，转移200μL上清液至新的离心管中，加入15μL磁珠混合液及400μL裂解液，涡旋30秒混匀，静置3分钟，混匀后上磁力架，静置聚集磁珠后，弃上清。

(3)将离心管从磁力架取下，加入500μL洗涤液1，涡旋10秒。

(4)将离心管放置于磁力架静置30秒，磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。

(5)将离心管从磁力架取下，加入500μL洗涤液2，涡旋10秒。

(6)将离心管放置于磁力架静置30秒，磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。

(7)短暂离心，将离心管放置于磁力架上静置10秒，吸尽残液。

(8)将离心管放于磁力架上，打开盖子，室温晾干5分钟。

(9)将离心管取下，加入100μL洗脱液，涡旋10秒。

(10)将离心管放于磁力架上，静置吸磁2分钟，转移洗脱液至新的离心管保存于-20℃。

3.根据权利要求1所述南美白对虾肝肠孢子虫疾病精准防控的整体解决技术方案，其特征在于步骤(2)荧光定量快速检测的具体操作如下：

(1)将检测试剂盒拿出充分解冻后，分别向PCR反应管中加入PCR反应液23μL。

(2)然后再分别加入2μL待检样品DNA/RNA提取液，剩下两个PCR反应管分别加入2μL阴性对照和阳性对照。

(3)最后分别向反应管加入20μL矿物油。

(4)短暂离心后放入荧光定量PCR仪中，按照检测试剂盒要求设置运行反应程序：

55℃运行1个循环5min，95℃运行1个循环30s，

95℃运行5s和60℃运行20s共运行40个循环，最后荧光收集。

(5)运行反应结束后，点击数据分析，根据最后扩增曲线循环值来判断检测样品是否携带病害基因以及携带量的多少。

4.根据权利要求1所述南美白对虾肝肠孢子虫疾病精准防控的整体解决技术方案，其特征在于步骤(3)现代中药技术和微生态技术干预的具体操作如下：

南美白对虾肝肠孢子虫处理方案：

针对养殖过程中，如经过荧光定量PCR检测养殖南美白对虾发现携带肝肠孢子虫并导致南美白对虾出现大量死亡时，可以如下方式来处理治疗：

虾肝肠孢虫处理方案(一般建议长至4-5cm后再开始处理)

第一天：全池泼洒用“善泽一号500ml/亩+芪兰素500ml/亩”；

第二天：用“善毒清2号，每亩1米水深40g”；

同时从第一天开始内服：每公斤饲料添加善泽2号15ml十善诺清15g，连服10天。

上述方式处理治疗南美白对虾肝肠孢子虫病虾后，死虾数量会得到大大降低，甚至降低为零死亡。

5.根据权利要求1所述南美白对虾肝肠孢子虫疾病精准防控的整体解决技术方案，其特征在于步骤(1)、(2)、(3)首次提出了基于“定量快速检测+中药技术干预(或微生态干预)”精准防控南美白对虾肝肠孢子虫病疾病的整体解决技术方案。