[发明专利]一种促进干细胞细胞因子产量的生产方法有效
| 申请号： | 202110197400.6 | 申请日： | 2021-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN112920994B | 公开（公告）日： | 2022-07-01 |
| 发明（设计）人： | 张海涛;李娜 | 申请（专利权）人： | 上海天安智谷干细胞科技集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/077;C07K16/22;C12P21/02;C07K14/475;C07K14/515 |
| 代理公司： | 南京中高专利代理有限公司 32333 | 代理人： | 卢丹丹 |
| 地址： | 200120 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 促进 干细胞 细胞因子 产量 生产 方法 | ||
1.一种高表达SCF和VEGF细胞因子的分化细胞的制备方法，其特征在于：人骨髓间充质干细胞采用10％胎牛血清的DMEM培养基培养达80％融合，开始加入含有5H2单克隆抗体的分化诱导液其组成为内含0.5mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、10mg/L胰岛素、0.2mmol/L吲哚美辛、1μmol/L地塞米松及10μmol/L的单克隆抗体和10％胎牛血清的DMEM培养基；每3d更换一次分化诱导液，持续诱导10d后收获所述细胞即为诱导后的分化细胞；其中，所述5H2单克隆抗体的轻链可变区的序列为SEQ ID NO：1，重链可变区的序列为SEQ ID NO：2。
2.一种SCF和VEGF细胞因子的制备方法，其特征在于将权利要求1所述制备方法制备得到的分化细胞接种于培养容器中进行培养；将过夜后的细胞用0.25％胰酶-EDTA溶液消化，然后离心，用0.9％生理盐水调整细胞浓度至1×108个细胞/mL，然后将细胞裂解，然后细胞裂解液转移至50mL离心管中，于20℃，5000r/min条件下离心10min，然后用0.22μm过滤器过滤裂解液上清，最后加入0.9％生理盐水、3mg/mL的EDTA，即可制得含有SCF和VEGF高含量的细胞因子。
3.一种特异性诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的培养基，其特征在于组成为内含0.5mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、10mg/L胰岛素、0.2mmol/L吲哚美辛、1μmol/L地塞米松及10μmol/L的5H2单克隆抗体和10％胎牛血清的DMEM培养基；其中，所述5H2单克隆抗体的轻链可变区的序列为SEQ ID NO：1，重链可变区的序列为SEQ ID NO：2。
4.权利要求3所述的培养基在特异性诱导骨髓间充质干细胞成脂分化中的应用。
5.一种5H2单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体的轻链可变区的序列为SEQ IDNO：1，重链可变区的序列为SEQ ID NO：2。
6.权利要求5所述的单克隆抗体在制备诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的培养基或培养液中的应用。
7.权利要求6所述的用途，其特征在于所述培养液或培养基中还含有其他合适的诱导物。
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