[发明专利]一种糖基化CD59酶联免疫检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种糖基化CD59酶联免疫检测试剂盒，由设在盒体内的包被有抗gCD59抗体的酶标板、gCD59标准品梯度溶液、样品稀释液、过氧化物酶标记的抗CD59单克隆抗体酶结合物、20×浓缩洗涤液、显色剂、终止液及封板膜、密封袋和说明书构成。本发明还公开了所述试剂盒在检测含gCD59生物样品中的应用。实验证实本发明的试剂盒稳定性高、选择性强，检测速度快、费用低廉、易于操作，克服了现有技术中检测gCD59时，灵敏度不高，操作时长等缺点，操作时间由400分钟缩短至45分钟，定量限由18.75pg/mL提升至12.5pg/mL，具有极大的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及一种糖基化CD59(gCD59)的检测，尤其涉及一种糖基化CD59酶联免疫检测试剂盒及其制备方法与应用，属于临床检验技术领域。

背景技术

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。在糖尿病患者人群中70％患者全身小血管和微血管出现增殖性病变，其发病机制与长期血糖升高、糖化蛋白终产物增多，细胞间粘附分子表达、某些细胞因子的增多及多糖类物质沉积与血管内皮下而引起的血管基底膜增厚有关。

糖基化CD59(gCD59)是一种新的生物标志物。CD59是一种补体调节蛋白，可保护“自身”细胞免受补体介导的损伤(Davies CS等。Glycation of CD59 impairs complementregulation on erythrocytes from diabetic subjects]。在糖尿病中，CD59被非酶糖基化物灭活，形成gCD59。血浆gCD59是一种可溶形式的CD59从细胞膜脱落。CD59是补体细胞溶解膜攻击复合物(MAC)分布广泛的膜结合抑制剂。CD59通过与新生MAC中的C8和/或C9结合而起作用，并干扰C9膜的插入和聚合。这种存在于所有细胞中的蛋白质通过一个脂尾锚定在膜的外表面。因此，它暴露于细胞外液和细胞外液中的葡萄糖水平。从细胞膜上脱落的可溶性CD59存在于循环和尿液中。已有研究表明，gCD59在糖尿病患者血液中的含量明显高于血糖正常人群。因此，检测人体液中gCD59的含量对于临床上糖尿病患者检测与筛查有指导意义。

文献报道的相关酶联免疫检测方法均为：抗CD59的单克隆抗体为捕捉抗体，抗gCD59的单克隆抗体为检测抗体，且通过酶标记二抗为羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶(HRP)标记物或SA-HRP，试剂盒灵敏度不高，操作时长长达200分钟(G Biosciences公司产品，未在国内注册)到400分钟(Pamela Ghosh，A Specific And Sensitive Assay For BloodLevels Of Glycated Cd59:A Novel Biomarker For Diabetes)。有关以抗gCD59的单克隆抗体为捕捉抗体、抗CD59的单克隆抗体为标记二抗体的检测方法未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种糖基化CD59酶联免疫检测试剂盒及其制备方法与应用。

本发明所述的糖基化CD59酶联免疫检测试剂盒，由设在盒体内的包被有抗gCD59抗体的酶标板、gCD59标准品梯度溶液、样品稀释液、过氧化物酶标记的抗CD59单克隆抗体酶结合物、20×浓缩洗涤液、显色剂、终止液及封板膜、密封袋和说明书构成；

其特征在于：

所述酶标板为透明聚苯乙烯96或48孔酶标板，且其各孔包被有浓度为10μg/mL的抗gCD59的鼠单克隆抗体Mab1；

所述gCD59标准品梯度溶液分别是：浓度梯度为0pg/mL、10pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL、2000pg/mL的7个标准品溶液，其中0pg/mL为标准品缓冲液；