[发明专利]一种检测RCL的引物探针组合、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种检测RCL的引物探针组合，其特征在于，包括引物对和探针，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，还包括内参引物对和内参探针，所述内参引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述内参引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述内参探针的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

3.一种检测RCL的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针组合。

4.一种检测RCL的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物探针组合。

5.一种检测RCL的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测样品的RNA，将所述RNA反转录为cDNA；

2)将所述步骤2)得到的cDNA以权利要求4所述的引物探针组合进行荧光定量PCR，以提取Jurkat细胞的cDNA为背景对照；

当待测样品和背景对照的3个Ct值都为Undetermined时，待测样品中没有RCL，检测结果为阴性；

当待测样品的3个Ct值都大于背景对照的Ct值时，待测样品为阴性；

当待测样品的2个Ct值大于背景对照的Ct值，1个小于背景对照的Ct值时，待测样品为阴性；

当待测样品的2个Ct值小于背景对照的Ct值，1个大于背景对照的Ct值时，待测样品为检出结果阳性；

当待测样品的3个Ct值都小于背景对照的Ct值时，待测样品检出结果为阳性。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2)荧光定量PCR的体系每30μL包括2×QuantiNova Probe PCR Mix 15μL、双蒸水4.85μL、浓度为10μM的权利要求1所述的引物对的上下游引物各1μL、浓度为10μM的权利要求1所述的探针0.5μL、浓度为10μM的内参引物对的上下游引物各1μL、内参探针0.5μL、ROX 0.15μL和cDNA 4μL。

7.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的运行程序包括：95℃2min；95℃5s，60℃30s，40个循环。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，以双蒸水为阴性对照。

9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，以所述步骤1)得到的RNA为RNA样品对照。

10.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，以含有VSVG基因和RPP30基因的质粒为阳性对照。