[发明专利]抗Trop2纳米抗体及其应用

说明书

本发明涉及抗体药物技术领域，尤其涉及抗Trop2纳米抗体及其应用。本发明公开了一组特异性针对Trop2的纳米抗体，公开了其VHH链的框架区FR和互补决定区CDR的氨基酸序列，同时还公布了编码该纳米抗体或其VHH链的基因序列。本发明提供的抗Trop2纳米抗体能有效与Trop2抗原结合。通过本发明所公布的纳米抗体基因序列，为基于Trop2靶点的研究包括抗体偶联药物及多特异性抗体药物开发提供了研发基础。

本案是申请日为2020年4月16日、申请号为CN202010301498.0、发明名称为“抗Trop2纳米抗体及其应用”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及生物医学或生物制药技术领域，公开了抗Trop2纳米抗体及其应用。

背景技术

Trop2属于TACSTD家族，是由TACSTD2基因编码表达的细胞表面糖蛋白，又名肿瘤相关钙离子信号转导子2(TACSTD2)、表皮糖蛋白1(EGP-1)、胃肠肿瘤相关抗原(GA733-1)、表面标志物1(M1S1)。TROP-2主要通过调节钙离子信号通路、细胞周期蛋白表达及降低纤黏蛋白黏附作用促进肿瘤细胞生长、增殖和转移。Trop2也可以与Wnt信号级联中的β-连环蛋白相互作用，因而对细胞核癌基因的转录、细胞的增殖起作用。

研究表明，Trop2在胃癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌和子宫内粘膜浆液性乳头癌等肿瘤中都有大量的表达，并证实其与肿瘤的转移和预后有明显的相关性，在肿瘤的发生中扮演着重要的角色。Trop2是一种跨膜蛋白，其细胞外结构域在多种肿瘤上过度表达，因此它是靶向治疗发展的天然候选。Trop2的组织表达局限性使得治疗的毒性降低，这也是靶向Trop2治疗的优势所在。以Trop2为靶点的抗体、抗体偶联物以及联合用药等多种形式的药物正处于研发中。抗Trop2抗体与其他化疗药物偶联的效用已在各种临床前研究中得到证实。用于治疗Trop2过表达的上皮恶性肿瘤的抗体偶联药物(ADC)IMMU-132已处于II/III期临床试验阶段。新型抗体偶联药物Sacituzumab govitecan(IMMU-132)以Trop2为靶点，它是利用人源化抗体hRS7作为靶向载体与伊立替康活性代谢产物SN38偶联而成，可用于治疗多种上皮恶性肿瘤如乳腺癌(三阴乳腺癌)、卵巢癌、小细胞肺癌等。此外，其他人源化的抗Trop2 IgG-SN-38偶联物，如抗Trop2hRS7-CL2A-SN-38抗体偶联药物，已被证明在多种肿瘤细胞系(Calu-3、Capan-1、BxPC-3和COLO-205)的异种移植模型中具有显著的特异性抗癌作用。

截至目前，市场上尚未有针对Trop2靶点的纳米抗体药物公布，而纳米抗体(nanobody，Nb)，即重链单域抗体VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chainantibody)—骆驼体内存在着天然缺失轻链的重链抗体(heavy-chain antibody，HCAb)，克隆其可变区而得到的只由一个重链可变区组成的单域抗体，是目前可以得到的具有完整功能的稳定的可结合抗原的最小单位。单域抗体具有稳定性高、水溶性好、人源化简单、靶向性高、穿透性强等特点，在免疫实验、诊断与治疗中，发挥着超乎想象的巨大功能。单域抗体正逐渐成为新一代抗体诊断及治疗中的新兴力量。

因此，本领域需要开发一种抗Trop2纳米抗体，尤其是具备良好的Trop2抗原结合性的抗Trop2纳米抗体。

发明内容

本发明提供了7株特异性针对Trop2的纳米抗体，同时提供纳米抗体的编码序列、制备方法。同时本发明为基于Trop2靶点的研究包括抗体偶联药物及多特异性抗体药物开发提供了研发基础。

在本发明的第一方面，本发明提供了一种抗Trop2纳米抗体的互补决定区CDR区。

在另一优选例中，所述Trop2纳米抗体包含一个特异性结合Trop2的免疫球蛋白单一可变结构域。在一些实施方案中，所述Trop2纳米抗体包含两个或更多个特异性结合Trop2的免疫球蛋白单一可变结构域。