[发明专利]一种新型冠状病毒中和抗体检测方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种新型冠状病毒中和抗体检测方法及试剂盒，所述微流控芯片的标记区标记有能与SARS‑CoV‑2抗原结合的竞争性物质，所述T检测区包被有能与SARS‑CoV‑2抗原结合的捕获性物质，所述C检测区包被有用于质控作用的抗原或抗体，所述样本加样管内预先干燥有纳米颗粒标记的SARS‑CoV‑2抗原。本发明通过体外构建新型冠状病毒空间模型及细胞表面受体空间模型，创新性的实现中和抗体在模拟间接竞争模式下，中和抗体含量的快速检测，同时能够真实有效的评估中和抗体中和新型冠状病毒的能力。本试剂盒具有准确度高、灵敏度高、特异性好、重复性好等特点，可用于新型冠状病毒中和抗体的批量、快速检测。

技术领域

本发明涉及免疫荧光检测技术领域，尤其是涉及一种新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及检测方法。

背景技术

人体接种疫苗后可通过免疫应答产生保护性抗体，即中和抗体，对中和抗体进行滴度测定，可以判断疫苗的临床疗效。因此对中和抗体的检测，可应用于疫苗的研发评价，以及疫苗研发成功后，正式应用于大众后，对个体自身免疫效果的评价。另外，对于治愈后的新冠患者检测，可以判断是否存在再次感染的风险。因此，对于中和抗体的检测决定了是否可以更安全地重返工作岗位或参加更多的社交活动。

SARS-CoV-2表面棘突S蛋白(spike protein)是冠状病毒表面重要的受体结合位点，其可与细胞表面病毒特异性受体结合、介导病毒外膜与细胞融合、病毒吸附及穿膜；冠状病毒S蛋白受体结合域(receptor binding domain，RBD)可使病毒与宿主细胞表面的血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2，ACE2)结合，并使病毒进入宿主细胞。当SARS-CoV-2在侵入机体时，会刺激机体产生具有保护作用的中和抗体，专门阻止病原微生物进入细胞，防止感染大部分中和抗体，如2M-10B11和ACE2-fc以S蛋白的RBD为靶点，并阻断其与ACE2结合，表现出中和活性。

西湖大学研究团队发现AXL是新冠病毒感染人类呼吸系统的潜在受体，研究团队发现新冠病毒在人类呼吸系统中可能存在其他重要受体。研究团队证明肺细胞上的AXL蛋白与新冠病毒刺突蛋白相结合，并在细胞膜上存在强共定位。且与呼吸系统上皮细胞结合强度排名前三的候选受体分别为：AXL蛋白、EGFR蛋白和LDLR蛋白。

目前已经建立的冠状病毒中和抗体检测方法有双抗原夹心法、间接法和竞争法。其中双抗原夹心法与间接法检测的是总抗体含量，不能针对性反应样本中的中和抗体含量。例如，目前已公开专利中，竞争法检测中和抗体含量多为常规竞争的方式。授权公告号为CN111781354B的已授权专利公开了一种新型冠状病毒中和性抗体滴度检测ELISA试剂盒。现有技术多为：标记抗原，包被受体蛋白，样本中的中和抗体与受体蛋白直接竞争抗原，通过结合的数量反应中和抗体的含量。该方法提供的主要为直接并同时竞争的内环境，存在的问题有：对于低滴度的中和抗体，竞争优势不显著，灵敏度较低，对于较高滴度的中和抗体，竞争梯度小，容易造成检测结果偏差大等问题。同时目前已知的免疫学检测中，中和抗体检测均为通过抗体浓度或数量的结合，反应中和抗体的浓度，同时现有技术多用于酶免、胶体金法等试剂盒的检测，采用微流控免疫荧光法实现快速检测，目前未见到。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及检测方法，本试剂盒通过体外构建新型冠状病毒空间模型及细胞表面受体空间模型，创新性的实现中和抗体在模拟间接竞争模式下，中和抗体含量的快速检测，同时能够真实有效的评估中和抗体中和新型冠状病毒的能力。本方法及试剂盒具有灵敏度高、特异性好、准确度高、重复性好等特点，可用于新型冠状病毒中和抗体的批量、快速检测。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：