[发明专利]一种MG53突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.mitsugumin 53(MG53)突变体，其特征在于，MG53的Coiled-coil结构域中的丝氨酸位点突变为除苏氨酸和酪氨酸以外的氨基酸。

2.权利要求1的MG53突变体，其特征在于，所述丝氨酸突变为非极性氨基酸。

3.权利要求2的MG53突变体，其特征在于，所述的非极性氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或蛋氨酸。

4.权利要求3的MG53突变体，其特征在于，所述的非极性氨基酸为丙氨酸，所述的MG53突变体为选自MG53 S150A、MG53 S189A、MG53 S211A中的任意一种或多种。

5.制备权利要求1-4中任一项的MG53突变体的方法，其包括以下步骤：

(1)对野生型MG53进行突变，得到MG53突变体，克隆到质粒中；

(2)在细胞中表达所述MG53突变体质粒；

(3)使用层析例如DEAE柱层析和CM柱层析，任选地Source 30Q柱层析纯化产生的MG53突变体蛋白。

6.权利要求5的方法，其中所述突变是利用定点突变试剂盒对野生型MG53质粒的全长序列进行定点诱变，得到所述MG53突变体质粒。

7.权利要求6的方法，其中所述野生型MG53是经密码子优化的。

8.权利要求6的方法，其中在所述DEAE柱层析中，结合液A为20mM Tris，pH 8.0，洗脱液B为20mM Tris和1.0M NaCl，pH 8.0，任选地用A和B的混合物中洗脱液B为5％(体积比)的溶液和/或洗脱液B洗脱。

9.权利要求6的方法，其中在所述CM柱层析中，结合液A为20mM PB，pH 6.0，洗脱液B为20mM PB和1.0M NaCl，pH 6.0,任选地用A和B的混合物中洗脱液B为10％(体积比)的溶液和/或A和B的混合物中洗脱液B为10％-30％(体积比)的梯度的溶液和/或洗脱液B洗脱。

10.权利要求6的方法，其中在所述Source 30Q柱层析中，结合液A为20mM Tris，pH8.5，洗脱液B为20mM Tris和1.0M NaCl，pH 8.5，任选地用洗脱液B洗脱。

11.药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项的MG53突变体。

12.权利要求11中的药物组合物，其还包括可药用的赋形剂或载体。

13.权利要求1-4中任一项的MG53突变体在制备用于预防和/或治疗与细胞膜损伤相关疾病的药物组合物中的用途。

14.权利要求13的用途，其中所述与细胞膜损伤相关疾病包括选自以下的一种或多种：与心肌细胞损伤相关疾病、与溃疡相关疾病、具有伤口特别是难愈合伤口的外伤、肠漏和肾脏损伤。

15.权利要求14的用途，其中所述与心肌细胞损伤相关的疾病包括选自与以下症状相关的疾病中的一种或多种：心肌缺血、心脏缺血/再灌损伤、心肌梗塞、心力衰竭、心律失常和心脏破裂。

16.权利要求14中的用途，其中所述与溃疡相关疾病包括选自以下的一种或多种：慢性溃疡、消化性溃疡、糖尿病足溃疡、糖尿病足坏疽、慢性胃溃疡。

17.包含MG53或权利要求1-4中任一项的MG53突变体的干粉制剂。