[发明专利]大蒜GMBFV,PVY,GCLV病毒RT-PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种大蒜GMBFV,PVY,GCLV病毒RT‑PCR检测试剂盒，具体是用大蒜组织的RNA为模板，反转录得到cDNA，再采用三对特异引物，一次RT‑PCR同时检测大蒜主要病毒大蒜螨传丝状病毒（Garlic mite borne filamentous virus，GMBFV），马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY），大蒜普通潜隐病毒（Garlic common latent virus，GCLV），其中，三对引物如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.6所示。本发明检测效率高，检测成本低，适合用于大规模大蒜材料的病毒检测。

技术领域

本发明属于作物病毒检测技术领域，具体涉及一种大蒜GMBFV,PVY,GCLV病毒RT-PCR检测试剂盒。

背景技术

大蒜（Allium sativum L.)是一种重要的烹饪类的草本植物，全世界的年产量达2228万吨（FAO 2011），并被广泛的应用（Keusgen M, et al, Characterization of someAllium hybrids by aroma precursors, aroma profiles, and alliinase activity. JAgric Food Chem. 2002, 50(10): 2884-90）。另外大蒜还有很高的药用价值（Mikaili P,et al, Therapeutic uses and pharmacological properties of garlic, shallot,and their biologically active compounds. Iran J Basic Med Sci. 2013, 16(10):1031-48）。大蒜病毒对大蒜的侵染不仅影响大蒜的产量同时影响大蒜鳞茎的质量。大蒜能感染多种病毒，通常情况为复合感染。大蒜常见的病毒包括洋葱黄矮病毒（Onion yellowdwarf virus， OYDV），韭葱黄条病毒Leek yellow stripe virus ，LYSV)，大蒜潜隐病毒（Garlic latent virus，GLV）和葱潜隐病毒（shallot latent virus，SLV），青葱X病毒属病毒（Allexivirus）的GarV-A，GarV-B，GarV-C，GarV-D，GarV-E，GarV-X和葱病毒X（shallotvirus x，ShV-X），大蒜螨传丝状病毒（Garlic mite borne filamentous virus，GMBFV），马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY），大蒜普通潜隐病毒（Garlic common latent virus，GCLV）。检测大蒜病毒感染的方法通常分为两类，即根据基因表达的最终产物RNA和蛋白质而定，以RNA为检测底物的Northern blot及RT-PCR方法可以检测编码蛋白质基因mRNA的表达量及miRNA，siRNA等非编码RNA。以蛋白质为检测底物的有酶联免疫法（ELISA），Westernblot等方法，其中ELISA检测方法灵敏度高，快速有效，适用于大批量样品的定性和半定量检测（Tsuneyoshi T and Sumi S, Differentiation among garlic viruses in mixedinfections based on RT-PCR procedures and direct tissue blottingimmunoassays, PHYTOPATHOLOGY, 1996, 86:‏ 253-259; Takaichi et al. Mixed virusinfections of garlic determined by a multivalent polyclonal antiserum andvirus effects on disease symptoms, PLANT DISEASE, 2001, ‏ 85: 71-7），但假阳性较多，具体操作过程中易污染，而且抗体的获得并不容易，且一次只能检测一种病毒。与酶联免疫法相比，反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法的灵敏度高，检测速度更快，如果利用多重PCR的话，可以一次检测多种病毒。