[发明专利]一种鼠疫菌显色分离培养基的制备方法

说明书

本申请公开了一种鼠疫菌显色分离培养基的制备方法，包括如下步骤：步骤S1：在基础成分中加入蒸馏水，调节其pH值，再进行高压灭菌处理；步骤S2：待步骤S1中的产物冷却至55℃时，加入抑菌成分，配置成指示性显色培养基。本申请的鼠疫菌显色分离培养基的制备方法，以CIN琼脂为基础，添加抑菌成分，制成指示性显色培养基，获得配制方法简单、配制成本低、分离效率更高的鼠疫菌显色分离培养基。鼠疫菌指示性显色培养基的工作原理是使用适当显色底物，在细菌特异性酶的作用下，发色基团游离并附着于菌落上，使菌显示一定的颜色。

技术领域

本申请涉及培养基技术领域，特别是涉及一种鼠疫菌显色分离培养基的制备方法。

背景技术

目前，鼠疫菌检测已有多种分子生物学方法和免疫方法，但传统的鼠疫细菌学方法仍然是鼠疫检测的“金标准”，鼠疫菌的分离培养在鼠疫防治工作中占有十分重要的地位，如果被检材料含菌量少，腐败严重，或含有鼠疫噬菌体，仅靠普通琼脂分离鼠疫菌是非常困难的，需采用选择敏感培养基同时也必须靠专业人员丰富经验才能挑选出可疑菌落，比较传统的选择敏感培养基均是在培养基成分中加入能抑制其它杂菌生长，又能促进鼠疫菌发育的物质，比如龙胆紫培养基、胆碲铜紫培养基等，这些培养基可以抑制腐败材料中的变形杆菌和大肠杆菌，但是鼠疫菌菌落很不典型，对鼠疫菌的分离仍然有影响。

显色培养基自1974年法国CHROMagar公司研发以来，因其准确性、敏感性和特异性高而被广泛应用。该培养基是使用培养法对微生物进行检验的重要工具，国外研制的耶尔森菌选择性培养基(CIN琼脂)被ISO委员会推荐使用，但因其价格昂贵，有时断货，在鼠疫疫情应急时不能及时供应，因此不能作为常规培养基应用。因此，需要研究一种适合鼠疫疫情应急时制作方便、供给无障碍、鼠疫菌易于分离筛选的显色培养基。

发明内容

本申请的目的在于克服上述问题或者至少部分地解决或缓减解决上述问题。

根据本申请的一个方面，提供了一种鼠疫菌显色分离培养基的制备方法，包括如下步骤：

步骤S1：在基础成分中加入蒸馏水，调节其pH值，再进行高压灭菌处理；

步骤S2：待步骤S1中的产物冷却至55℃时，加入抑菌成分，配置成指示性显色培养基。

可选地，所述步骤S2中，所述抑菌成分为0.5％～1.5％胆盐。

可选地，所述步骤S2中，所述抑菌成分为1％胆盐。

可选地，所述步骤S1中，基础成分包括如下组分：

蛋白胨20g，酵母菌2g，甘露醇12g，K₂HPO₄2g，NaCl 1g，亚硫酸钠0.25g，中性红0.03g，结晶紫0.001g，琼脂15g，赫氏消化液200ml，去氧胆酸0.36g。

可选地，所述步骤S2中，所述抑菌成分为1g胆。

可选地，所述步骤S1中，加入的蒸馏水的体积为1000ml。

可选地，所述步骤S1中，所调节的pH值为7.0～7.4。

可选地，所述步骤S1中，所述高压灭菌处理的压力为0.15MP，温度为121℃，时间为30min。

可选地，所述步骤S1中所采用的赫氏消化液的制备方法如下：

取自来水5000ml加入搅碎去脂腱牛肉3000g,煮沸30min，待冷却至56℃加入猪胰脏250g,无水碳酸钠50-60g,充分混匀矫正PH值为7.8，加入氯仿80-100ml，扎紧瓶口，置于37振荡温箱内消化7-9日，测氨基氮达到500-800mg/L即可。