[发明专利]一种新型核酸免提取保存液

说明书

本发明“一种新型核酸免提取保存液”，公开了一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法，该保存液包括如下组份：表面活性剂0.1‑2％，酸碱缓冲剂0.1‑2％，柠檬酸盐1‑5％，弱酸0.1‑5％，胍盐0‑10％，蛋白酶K0‑0.1％，螯合剂0.1‑1％，防腐剂0.1‑2％，其余为水，该保存液用于组织、细胞分析样本的保存，不仅包括冠状病毒、流感病毒、手足口病毒、麻疹风疹病毒，也包括其他类别的病毒和支原体、衣原体，鼻、咽拭子置于该保存液后其独特组份可以保护核酸RNA免受RNA酶的降解以及保护脱氧核糖核酸DNA免受DNA酶的降解，联合使用多种防腐剂使该试剂具有较强的抗细菌和抗真菌作用。

技术领域：

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种新型的无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法。

背景技术：

核酸是指脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子聚合物，为生命的最基本物质之一，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，核酸由核苷酸组成，而核苷酸单体由五碳糖、磷酸基和含氮碱基组成；如果五碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果五碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。病毒(Virus)是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸(DNA或RNA)且必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物，如新型冠状病毒2019-nCoV、乙肝病毒、流感病毒等。

对于病毒的保存，传统的方法多采用磷酸盐、氯化钠等常用成份，其不足之处在于仅能用于保存，后续检测前仍需要再次提取核酸，即为传统保存-提取-检测步骤之一，操作麻烦。因此，研究一种保存与提取合二为一的试剂来替代常规保存液用于新冠病毒等样本的检测具有重要意义，目前已有部分替代物用于病毒样本的保存。发明专利“一种免核酸提取的病毒保存液(申请号为202010148767.4)”公开了一种免核酸提取的病毒保存液，虽然可以进行病毒保存，但有如下不足：1、吐温20更易起泡沫，由于一般采样管容积较小，泡沫容易溢出管外造成交叉感染，同时吐温20影响溶液外观和透光度；2、酸性蛋白酶价格较贵，较难大面积普及使用。发明专利“一种核酸免提取试剂及其使用方法(申请号为202011191934.X)”公开了一种核酸免提取试剂的技术，但有如下不足：1、Chelex-100和洋地黄皂苷价格较贵且不易获得；2、仅有Tris-Hcl单一缓冲剂，缓冲能力不强。

发明内容：

为了解决上述技术的不足，本发明“一种新型核酸免提取保存液”旨在提供一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法，该保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％，酸碱缓冲剂0.1-2％，柠檬酸盐1-5％，弱酸0.1-5％，胍盐0-10％，蛋白酶K0-0.1％，螯合剂0.1-1％，防腐剂0.1-2％，其余为水，包括该核酸免提取保存液的制备方法，该病毒保存液用于组织、细胞分析样本的保存，不仅包括冠状病毒、流感病毒、手足口病毒、麻疹风疹病毒，也包括其他类别的病毒和支原体、衣原体，将采集到的具有代表性的病毒保存于该保存液，鼻、咽拭子置于该新型核酸免提取保存液后其独特组份可以保护核酸RNA免受RNA酶的降解以及保护脱氧核糖核酸DNA免受DNA酶的降解，联合使用多种防腐剂使该试剂具有较强的抗细菌和抗真菌作用。

本发明所采用的技术方案是：

一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，上述保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％，酸碱缓冲剂0.1-2％，柠檬酸盐1-5％，弱酸0.1-5％，胍盐0-10％，蛋白酶K0-0.1％，螯合剂0.1-1％，防腐剂0.1-2％，其余为水，包括该核酸免提取保存液的制备方法，是一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液。

一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的表面活性剂是指曲拉通100、曲拉通114、吐温40、吐温60、吐温80、NP-40的一种或多种的混合物。