[发明专利]叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针的制备方法和应用

权利要求书

1.一种叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将柠檬酸、双氰胺溶于超纯水，反应温度为160~200℃，反应获得的产物稀释后过滤，将过滤后的溶液透析冷冻干燥得氮掺杂石墨烯量子点；

步骤二，将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、羟基琥珀酰亚胺、叶酸与PBS缓冲液混合均匀，在室温及搅拌条件下，加入步骤一所述的氮掺杂石墨烯量子点固体粉末，将反应得到的产物离心，过滤，透析，最终冷冻干燥得到叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点；

步骤三，取步骤二合成的叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点固体粉末分散于超纯水中，超声处理并在温度为40~60℃条件下加热，备用；

步骤四，向银盐的水溶液中滴加30%的氨水，直至水溶液中没有沉淀变为澄清，在温度为40~60℃条件下加热后备用；

步骤五，将所述步骤三和步骤四配制好的溶液混合，温度为40~60℃条件下加热搅拌，反应完成后过滤收集滤液，溶液经冷冻干燥得叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米固体粉末。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤一中，所述的柠檬酸与双氰胺的投料比为(1~3)：(0.5~1.5)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤二中，所述的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、羟基琥珀酰亚胺、叶酸、氮掺杂石墨烯量子点的投料比为1:(1~2):(2~3):(0.2~0.6)。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤二中，PBS的pH值为7.0~7.8。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤一和步骤二中，透析时，透析袋的截留分子量为500~1000 Da。

6.一种叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针，其特征在于：由权利要求1至5任一项所述的方法制备而成。

7.权利要求6所述的叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针在测定Hg²⁺或GSH中的应用。

8.一种检测Hg²⁺或GSH浓度的方法，其特征在于：

检测Hg²⁺的浓度时，首先取权利要求6所述的叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针溶液，在溶液中加入不同浓度的Hg²⁺，用磷酸盐缓冲溶液定容，在荧光仪下测定其荧光光谱；随着Hg²⁺的浓度增加，该荧光探针的荧光发射强度逐渐下降，由此可制作标准曲线，从而通过该探针荧光强度的变化检测Hg²⁺的浓度；

检测GSH浓度时，首先取Hg²⁺溶液和权利要求6所述的叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针溶液混合，在溶液中加入不同浓度的GSH，用磷酸盐缓冲溶液定容，在荧光仪下测定其荧光光谱；随着GSH的浓度增加，该体系的荧光发射强度逐渐升高，由此制作标准曲线，从而通过该体系荧光强度的变化检测GSH的浓度。

9.权利要求6所述的叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针在癌细胞靶向荧光成像中的应用。

10.一种癌细胞靶向荧光成像方法，其特征在于：癌细胞孵育贴壁，然后将权利要求6所述的叶酸修饰氮掺杂石墨烯量子点/银纳米荧光探针加入细胞培养基，混匀，孵育细胞结束后，采用激光共聚焦显微镜在不同波长下拍摄细胞图片，即完成癌细胞的靶向成像。