[发明专利]一种表达鸡传染性支气管炎病毒S蛋白的重组新城疫病毒及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种表达鸡传染性支气管炎病毒S蛋白的重组新城疫病毒及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。为了提高鸡传染性疾病的免疫率。本发明提供一种表达鸡传染性支气管炎病毒S蛋白的重组新城疫病毒是同时表达基因VII型新城疫病毒F蛋白、HN蛋白和传染性支气管炎病毒GI‑19基因型毒株纤突蛋白的疫苗株，命名为rLa‑FHN‑OPSFTM，保藏号是：CGMCC NO.20131。筛选获得蛋白表达水平高、免疫原性好、能够对我国新城疫病毒和传染性支气管炎病毒流行强毒株提供坚实保护的重组病毒。本发明获得的重组病毒可作为预防新城疫和传染性支气管炎的二价疫苗的候选毒株，具有重要的实际应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种表达鸡传染性支气管炎病毒S蛋白的重组新城疫病毒及其制备方法与应用。

背景技术

新城疫(Newcastle Disease，ND)和鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是除高致病性禽流感之外世界各国养禽业面临的2种最重要的疫病，每年给养禽业造成重大经济损失，同时也给人类公共卫生造成重要挑战，是世界各国面临的重大问题。新城疫是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV)引起的一种禽类的急性、高度接触性传染病，严重威胁世界范围内的家禽养殖业(Alexander,Aldous et al.2012；Ganar,Das etal.2014；Dimitrov,Afonso et al.2017)。新城疫是由新城疫病毒引起的一种禽类烈性传染病，严重危害世界范围内的家禽养殖业，疫苗免疫是控制该病的有效措施。新城疫病毒存在多种基因型，世界范围内应用最为广泛的疫苗株属于基因II型，而当前我国以及世界众多地区优势流行的强毒株属于基因VII型，疫苗毒株与流行强毒株之间的遗传和抗原性差异导致疫苗不能对流行强毒株提供有效的保护。目前已有商品化针对基因VII型新城疫病毒的灭活疫苗，但该疫苗不能用于雏鸡的首次免疫。研制能够用于所有日龄鸡免疫且与基因VII型流行强毒株抗原性匹配的新型活疫苗尤为必要。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种所有日龄鸡均可免疫且与基因VII型流行强毒株抗原性匹配的新型活疫苗，为了提高鸡传染性疾病的免疫率，本发明提供了一种表达鸡传染性支气管炎病毒S蛋白的重组新城疫病毒，所述重组新城疫病毒是同时表达基因VII型新城疫病毒F蛋白、HN蛋白和传染性支气管炎病毒GI-19基因型毒株纤突蛋白的疫苗株，命名为rLa-FHN-OPSFTM，保藏号是：CGMCC NO.20131。(建议分类命名为：表达鸡传染性支气管炎病毒S蛋白的重组新城疫病毒)保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2021年01月13日。

本发明还提供了上述的重组新城疫病毒在制备预防鸡病毒性传染病疫苗中的应用。

进一步地限定，所述鸡病毒性传染病疫苗为预防新城疫和传染性支气管炎的二价疫苗。

本发明还提供了上述的重组新城疫病毒的制备方法，所述构建方法的具体步骤如下：

步骤1：构建表达基因VII型新城疫病毒F和HN蛋白的重组病毒载体：

1)构建重组质粒pNDFL-rF：根据含有基因II型新城疫病毒La Sota株全长cDNA的质粒pNDFL序列以及基因VII型NDV毒株CK/CH/HLJ/1/06的基因组序列，通过同源重组的方法将质粒pNDFL中位于6489-8150nt的F基因的CDS替换NDV CK/CH/HLJ/1/06毒株F基因的CDS，构建获得质粒pNDFL-rF；所述NDV CK/CH/HLJ/1/06毒株F基因的CDS序列如SEQ ID NO:25所示；